| 產(chǎn)地類別：進口 | 供應(yīng)商性質(zhì)：一般經(jīng)銷商 |
QIAGEN OneStep Ahead RT-PCR Kit試劑盒適用于快速一步法RT-PCR，靈敏度高、特異性強、保真性出色
具有獨特的兩階段熱啟動特性，確?？稍谑覝貤l件下進行反應(yīng)體系構(gòu)建
專有設(shè)計的酶混合液可顯著提高反應(yīng)特異性、靈敏度和保真性
速度更快的1小時快速熱循環(huán)程序
內(nèi)置加樣變色指示劑，減少移液錯誤
雙重PCR擴增能力，可同時擴增內(nèi)對照或內(nèi)參
QIAGEN One-Step Ahead RT-PCR Kit中含有Sensiscript和Omniscript兩種不同的逆轉(zhuǎn)錄酶，以及平衡配比的Taq DNA聚合酶和具有校對功能的高保真酶。熱啟動酶使得反應(yīng)體系構(gòu)建得以在室溫條件下進行，便利的單管操作和優(yōu)化的反應(yīng)體系確保實驗獲得高靈敏度結(jié)果。帶有顏色的指示劑染料使得實驗人員能夠分別對于電泳過程進行監(jiān)控，并減少加樣過程的失誤。
Performance
QIAGEN OneStep Ahead RT-PCR Kit可對任意RNA模板進行便利、高靈敏度、特異性的RT-PCR。該試劑盒含有經(jīng)優(yōu)化的組分，使得逆轉(zhuǎn)錄和PCR擴增可在同一混合液中“一步”完成。獨特的酶配比和專門的反應(yīng)緩沖液確保了高效、特異性的逆轉(zhuǎn)錄反應(yīng)和PCR反應(yīng)在同一反應(yīng)管中有序進行，無需額外的優(yōu)化步驟。
在逆轉(zhuǎn)錄步驟，Omniscript和Sensiscript逆轉(zhuǎn)錄酶上結(jié)合有逆轉(zhuǎn)錄阻斷基團，使其處于非激活狀態(tài)，不會在室溫條件下生成非特異的轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物。當溫度升高至50°C時，阻斷基團從逆轉(zhuǎn)錄酶上解離，逆轉(zhuǎn)錄酶迅速達到完全激活狀態(tài)。
PCR擴增步驟受三種經(jīng)平衡配比的DNA聚合酶催化。在室溫下，QuantiNova DNA Polymerase處于抗體介導的阻斷酶活狀態(tài)。它在95oC孵育5分鐘后即可恢復活性，在一個熱循環(huán)即可實現(xiàn)高度特異性的擴增。HotStarTaq DNA Polymerase的酶活性逐漸提高，確保PCR的高產(chǎn)量。具有校對功能的高保真DNA聚合酶具有3'→5'外切酶活性，同樣是95oC孵育5分鐘活化，確保擴增的高度準確性和持續(xù)合成能力。預混液中含有新型雙陽離子PCR buffer，確保在寬泛的退火溫度范圍內(nèi)，都可生成高特異性PCR產(chǎn)物。RT-PCR反應(yīng)還采用了Q-Solution，這一組分有助于對于富含GC或含有復雜二級結(jié)構(gòu)的模板進行高效的逆轉(zhuǎn)錄和擴增。
室溫下進行反應(yīng)體系構(gòu)建這一特點，使該試劑盒可便利的用于自動化體系構(gòu)建流程中。PCR預混液含有反應(yīng)所需緩沖液、dNTP和DNA聚合酶,而含有逆轉(zhuǎn)錄酶和RNase抑制劑的RT-Mix則單獨包裝，確保逆轉(zhuǎn)錄反應(yīng)不會提前進行。在進行反應(yīng)體系構(gòu)建時，僅需將引物、模板RNA和RT-Mix加入預混液中。
該試劑盒中含有加樣指示劑，能有效防止移液錯誤的發(fā)生，確保結(jié)果的可靠。顯色體系由預混液指示劑和模板指示劑兩部分組成，通過顏色變化即可輕松判斷反應(yīng)體系中是否加入模板，減少反應(yīng)構(gòu)建時的失誤。該試劑盒還經(jīng)專門優(yōu)化，可適用于雙重PCR，能夠在單一反應(yīng)體系中同時擴增陽性內(nèi)質(zhì)控。試劑盒中含有的RNase抑制劑能夠防止因RNase污染而導致的RNA降解。
Principle
QIAGEN OneStep Ahead RT-PCR Kit適用于對各種RNA模板進行靈敏、便利的一步法RT-PCR。酶混合液經(jīng)過特別配比，適用用于逆轉(zhuǎn)錄和PCR擴增反應(yīng)。Omniscript和Sensiscript逆轉(zhuǎn)錄酶對RNA模板具有高親和性，即便對于低至1 pg的RNA也能進行高效、靈敏的逆轉(zhuǎn)錄。逆轉(zhuǎn)錄反應(yīng)結(jié)束后，95°C孵育5分鐘，激活DNA聚合酶，同時逆轉(zhuǎn)錄酶失活。這一熱啟動步驟能夠避免產(chǎn)生引物二聚體等非特異性擴增產(chǎn)物，并且減少背景條帶彌散的發(fā)生，確保高度靈敏性、可重復的RT-PCR反應(yīng)。
引物退火溫度取決于其堿基組成、引物濃度和離子反應(yīng)環(huán)境。QIAGEN PCR Buffers含有K+和NH4+，確保在寬泛的退火溫度范圍內(nèi)，均可生成特異性PCR產(chǎn)物。在此條件下非特異性結(jié)合的引物二聚體無法穩(wěn)定存在，因此可確保反應(yīng)的特異性。由于反應(yīng)對于溫度條件的要求降低，減少了繁瑣的溫度優(yōu)化過程。與此相反，在使用僅含有K+的的PCR或一步法RT-PCR緩沖液時，理想的PCR退火溫度范圍較小，并且難以預測。QIAGEN OneStep Ahead RT-PCR Buffer經(jīng)特別設(shè)計，能夠用于高效的逆轉(zhuǎn)錄和PCR擴增反應(yīng)。緩沖液中含有的新型添加物組分能夠防止逆轉(zhuǎn)錄酶對于PCR擴增反應(yīng)的抑制，解決了這一在一步法RT-PCR經(jīng)常面臨的問題。這一特制的緩沖液確保引物能夠在寬泛的溫度和Mg2+濃度范圍內(nèi)實現(xiàn)與模板的特異性結(jié)合，進而確保對各種RNA模板進行靈敏、高效的RT-PCR反應(yīng)。
QIAGEN OneStep Ahead RT-PCR Kit中含有特殊的Q-Solution組分，它能夠?qū)τ诤怂岬娜劢庑袨檫M行修飾，促進富含GC或二級結(jié)構(gòu)的困難模板的逆轉(zhuǎn)錄和擴增。QIAGEN OneStep RT-PCR Kit含有進行RT-PCR的全部所需試劑，適用于即便是最敏感的應(yīng)用（參見下表）。
| QIAGEN OneStep Ahead RT-PCR | 特性 | 優(yōu)勢 |
|---|---|---|
| Sensiscript和Omniscript逆轉(zhuǎn)錄酶 | 寬泛的RNA模板量范圍（0.1 pg – 2 μg） 靈敏性高 熱啟動活性 | 在室溫條件下進行反應(yīng)體系構(gòu)建 可在自動化流程中使用 |
| QuantiNova HotStarTaq熱啟動高保真聚合酶 | 特異性產(chǎn)物 熱啟動活性 更高的保真性 熱循環(huán)時間短 | 便利的室溫下反應(yīng)體系構(gòu)建 準確性高 可擴增長序列（<4 kb） 熱循環(huán)時間短（約1小時） |
| 含有DNA聚合酶、緩沖液和dNTP的預混液 | 專有的雙陽離子緩沖液體系 經(jīng)優(yōu)化可用于雙重PCR反應(yīng) | 無需優(yōu)化 便利的反應(yīng)體系構(gòu)建 逆轉(zhuǎn)錄酶不會抑制PCR反應(yīng) 可同時擴增陽性對照，提高反應(yīng)可靠性 |
| RNase抑制劑 | 抑制RNase活性 | 避免RNA降解 |
| Q-Solution | 促進富含GC的模板擴增 | 反應(yīng)性能更加可靠 |
| 加樣變色指示劑 | 惰性的橙色和藍色染料 凝膠電泳時橙色染料為50 bp，藍色為4000 bp | 減少移液錯誤，確保反應(yīng)準確性 可作為凝膠示蹤染料 |
Procedure
QIAGEN OneStep Ahead RT-PCR Kit能夠進行便利、快速的RT-PCR反應(yīng)，適用于多種應(yīng)用，包括病毒檢測、分子診斷研究、以及基因表達分析。只需將逆轉(zhuǎn)錄酶混合液、引物和模板加入到預混液中，即可開始熱循環(huán)。反應(yīng)體系構(gòu)建可以在室溫條件下進行，可選擇性加入預混液和模板變色指示劑，以避免在移液過程中可能發(fā)生的錯誤。反應(yīng)混合液中含有逆轉(zhuǎn)錄和PCR擴增反應(yīng)所需的全部試劑。
Applications
QIAGEN OneStep Ahead RT-PCR Kit適用于以下RT-PCR應(yīng)用：
病毒檢測
基因表達分析
QIAGEN OneStep Ahead RT-PCR Kit試劑盒
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注：該產(chǎn)品未在中華人民共和國食品藥品監(jiān)督管理部門申請醫(yī)療器械注冊和備案，不可用于臨床診斷或治療等相關(guān)用途。
