質(zhì)譜介紹
上一篇 / 下一篇 2008-05-10 23:59:36/ 個人分類:質(zhì)譜
作者:SHL
質(zhì)譜法是將被測物質(zhì)離子化,按離子的質(zhì)荷比分離,測量各種離子譜峰的強度而實現(xiàn)分析目的的一種分析方法。質(zhì)量是物質(zhì)的固有特征之一,不同的物質(zhì)有不同的質(zhì)量譜——質(zhì)譜,利用這一性質(zhì),可以進行定性分析(包括分子質(zhì)量和相關(guān)結(jié)構(gòu)信息);譜峰強度也與它代表的化合物含量有關(guān),可以用于定量分析。質(zhì)譜儀一般由四部分組成:進樣系統(tǒng)——按電離方式的需要,將樣品送入離子源的適當(dāng)部位;離子源——用來使樣品分子電離生成離子,并使生成的離子會聚成有一定能量和幾何形狀的離子束;質(zhì)量分析器——利用電磁場(包括磁場、磁場和電場的組合、高頻電場、和高頻脈沖電場等)的作用將來自離子源的離子束中不同質(zhì)荷比的離子按空間位置,時間先后或運動軌道穩(wěn)定與否等形式進行分離;檢測器——用來接受、檢測和記錄被分離后的離子信號。一般情況下,進樣系統(tǒng)將待測物在不破壞系統(tǒng)真空的情況下導(dǎo)入離子源(10-6~10-8mmHg),離子化后由質(zhì)量分析器分離再檢測;計算機系統(tǒng)對儀器進行控制、采集和處理數(shù)據(jù),并可將質(zhì)譜圖與數(shù)據(jù)庫中的譜圖進行比較。
1. 直接進樣:
在室溫和常壓下,氣態(tài)或液態(tài)樣品可通過一個可調(diào)噴口裝置以中性流的形式導(dǎo)入離子源。吸附在固體上或溶解在液體中的揮發(fā)性物質(zhì)可通過頂空分析器進行富集,利用吸附柱捕集,再采用程序升溫的方式使之解吸,經(jīng)毛細(xì)管導(dǎo)入質(zhì)譜儀。對于固體樣品,常用進樣桿直接導(dǎo)入。將樣品置于進樣桿頂部的小坩堝中,通過在離子源附近的真空環(huán)境中加熱的方式導(dǎo)入樣品,或者可通過在離子化室中將樣品從一可迅速加熱的金屬絲上解吸或者使用激光輔助解吸的方式進行。這種方法可與電子轟擊電離、化學(xué)電離以及場電離結(jié)合,適用于熱穩(wěn)定性差或者難揮發(fā)物的分析。目前質(zhì)譜進樣系統(tǒng)發(fā)展較快的是多種液相色譜/質(zhì)譜聯(lián)用的接口技術(shù),用以將色譜流出物導(dǎo)入質(zhì)譜,經(jīng)離子化后供質(zhì)譜分析。主要技術(shù)包括各種噴霧技術(shù)(電噴霧,熱噴霧和離子噴霧);傳送裝置(粒子束)和粒子誘導(dǎo)解吸(快原子轟擊)等。
2. 電噴霧接口:
帶有樣品的色譜流動相通過一個帶有數(shù)千伏高壓的針尖噴口噴出,生成帶電液滴,經(jīng)干燥氣除去溶劑后,帶電離子通過毛細(xì)管或者小孔直接進入質(zhì)量分析器。傳統(tǒng)的電噴霧接口只適用于流動相流速為1~5μl/min的體系,因此電噴霧接口主要適用于微柱液相色譜。同時由于離子可以帶多電荷,使得高分子物質(zhì)的質(zhì)荷比落入大多數(shù)四極桿或磁質(zhì)量分析器的分析范圍(質(zhì)荷比小于4000),從而可分析分子量高達幾十萬道爾頓(Da)的物質(zhì)。
3. 熱噴霧接口:
存在于揮發(fā)性緩沖液流動相(如乙酸銨溶液)中的待測物,由細(xì)徑管導(dǎo)入離子源,同時加熱,溶劑在細(xì)徑管中除去,待測物進入氣相。其中性分子可以通過與氣相中的緩沖液離子(如NH4+)反應(yīng),以化學(xué)電離的方式離子化,再被導(dǎo)入質(zhì)量分析器。熱噴霧接口適用的液體流量可達2ml/min,并適合于含有大量水的流動相,可用于測定各種極性化合物。由于在溶劑揮發(fā)時需要利用較高溫度加熱,因此待測物有可能受熱分解。
4. 離子噴霧接口:
在電噴霧接口基礎(chǔ)上,利用氣體輔助進行噴霧,可提高流動相流速達到1ml/min。電噴霧和離子噴霧技術(shù)中使用的流動相體系含有的緩沖液必須是揮發(fā)性的。
5. 粒子束接口:
將色譜流出物轉(zhuǎn)化為氣溶膠,于脫溶劑室脫去溶劑,得到的中性待測物分子導(dǎo)入離子源,使用電子轟擊或者化學(xué)電離的方式將其離子化,獲得的質(zhì)譜為經(jīng)典的電子轟擊電離或者化學(xué)電離質(zhì)譜圖,其中前者含有豐富的樣品分子結(jié)構(gòu)信息。但粒子束接口對樣品的極性,熱穩(wěn)定性和分子質(zhì)量有一定限制,最適用于分子量在1000Da以下的有機小分子測定。
6. 解吸附技術(shù):
將微柱液相色譜與粒子誘導(dǎo)解吸技術(shù)(快原子轟擊,液相二次粒子質(zhì)譜)結(jié)合,一般使用的流速在1~10μl/min之間,流動相須加入微量難揮發(fā)液體(如甘油)?;旌弦后w通過一根毛細(xì)管流到置于離子源中的金屬靶上,經(jīng)溶劑揮發(fā)后形成的液膜被高能原子或者離子轟擊而離子化。得到的質(zhì)譜圖與快原子轟擊或者液相二次離子質(zhì)譜的質(zhì)譜圖類似,但是本底卻大大降低。
離子源的性能決定了離子化效率,很大程度上決定了質(zhì)譜儀的靈敏度。常見的離子化方式有兩種:一種是樣品在離子源中以氣體的形式被離子化,另一種為從固體表面或溶液中濺射出帶電離子。在很多情況下進樣和離子化同時進行。
1. 電子轟擊電離(EI):
氣化后的樣品分子進入離子化室后,受到由鎢或錸燈絲發(fā)射并加速的電子流的轟擊產(chǎn)生正離子。離子化室壓力保持在10-4~10-6mmHg。轟擊電子的能量大于樣品分子的電離能,使樣品分子電離或碎裂。電子轟擊質(zhì)譜能提供有機化合物最豐富的結(jié)構(gòu)信息,有較好的重現(xiàn)性,其裂解規(guī)律的研究也最為完善,已經(jīng)建立了數(shù)萬種有機化合物的標(biāo)準(zhǔn)譜圖庫可供檢索。其缺點在于不適用于難揮發(fā)和熱穩(wěn)定性差的樣品。
2. 化學(xué)電離(CI):
引入一定壓力的反應(yīng)氣進入離子化室,反應(yīng)氣在具有一定能量的電子流的作用下電離或者裂解。生成的離子和反應(yīng)氣分子進一步反應(yīng)或與樣品分子發(fā)生離子分子反應(yīng),通過質(zhì)子交換使樣品分子電離。常用的反應(yīng)氣有甲烷,異丁烷和氨氣?;瘜W(xué)電離通常得到準(zhǔn)分子離子,如果樣品分子的質(zhì)子親和勢大于反應(yīng)氣的質(zhì)子親和勢,則生成〔M+H〕+,反之則生成〔M-H〕+。根據(jù)反應(yīng)氣壓力不同,化學(xué)電離源分為大氣壓、中氣壓(0.1~10mmHg)和低氣壓(10-6mmHg)三種。大氣壓化學(xué)電離源適合于色譜和質(zhì)譜聯(lián)用,檢測靈敏度較一般的化學(xué)電離源要高2~3個數(shù)量級,低氣壓化學(xué)電離源可以在較低的溫度下分析難揮發(fā)的樣品,并能使用難揮發(fā)的反應(yīng)試劑,但是只能用于傅里葉變換質(zhì)譜儀。
3. 快原子轟擊(FAB):
將樣品分散于基質(zhì)(常用甘油等高沸點溶劑)制成溶液,涂布于金屬靶上送入FAB離子源中。將經(jīng)強電場加速后的惰性氣體中性原子束(如氙)對準(zhǔn)靶上樣品轟擊。基質(zhì)中存在的締合離子及經(jīng)快原子轟擊產(chǎn)生的樣品離子一起被濺射進入氣相,并在電場作用下進入質(zhì)量分析器。如用惰性氣體離子束(如銫或氬)來取代中性原子束進行轟擊,所得質(zhì)譜稱為液相二次離子質(zhì)譜(LSIMS)。此法優(yōu)點在于離子化能力強,可用于強極性、揮發(fā)性低、熱穩(wěn)定性差和相對分子質(zhì)量大的樣品及EI和CI難于得到有意義的質(zhì)譜的樣品。FAB比EI容易得到比較強的分子離子或準(zhǔn)分子離子;不同于CI的一個優(yōu)勢在于其所得質(zhì)譜有較多的碎片離子峰信息,有助于結(jié)構(gòu)解析。缺點是對非極性樣品靈敏度下降,而且基質(zhì)在低質(zhì)量數(shù)區(qū)(400以下)產(chǎn)生較多干擾峰。FAB是一種表面分析技術(shù),需注意優(yōu)化表面狀況的樣品處理過程。樣品分子與堿金屬離子加合,如〔M+Na〕和〔M+K〕,有助于形成離子。這種現(xiàn)象有助于生物分子的離子化。因此,使用氯化鈉溶液對樣品表面進行處理有助于提高加合離子的產(chǎn)率。在分析過程中加熱樣品也有助于提高產(chǎn)率。在FAB離子化過程中,可同時生成正負(fù)離子,這兩種離子都可以用質(zhì)譜進行分析。樣品分子如帶有強電子捕獲結(jié)構(gòu),特別是帶有鹵原子,可以產(chǎn)生大量的負(fù)離子。負(fù)離子質(zhì)譜已成功用于農(nóng)藥殘留物的分析。
4. 場電離(field ionization,F(xiàn)I)和場解吸(field desorption,F(xiàn)D):
FI離子源由距離很近的陽極和陰極組成,兩極間加上高電壓后,陽極附近產(chǎn)生高達10+7~10+8V/cm的強電場。接近陽極的氣態(tài)樣品分子產(chǎn)生電離形成正分子離子,然后加速進入質(zhì)量分析器。對于液體樣品(固體樣品先溶于溶劑)可用FD來實現(xiàn)離子化。將金屬絲浸入樣品液,待溶劑揮發(fā)后把金屬絲作為發(fā)射體送入離子源,通過弱電流提供樣品解吸附所需能量,樣品分子即向高場強的發(fā)射區(qū)擴散并實現(xiàn)離子化。FD適用于難氣化,熱穩(wěn)定性差的化合物。FI和FD均易得到分子離子峰。
5. 大氣壓電離源(API):
API是液相色譜/質(zhì)譜聯(lián)用儀最常用的離子化方式。常見的大氣壓電離源有三種:大氣壓電噴霧(APESI),大氣壓化學(xué)電離(APCI)和大氣壓光電離(APPI)。電噴霧離子化是從去除溶劑后的帶電液滴形成離子的過程,適用于容易在溶液中形成離子的樣品或極性化合物。因具有多電荷能力,所以其分析的分子量范圍很大,既可用于小分子分析,又可用于多肽、蛋白質(zhì)和寡聚核苷酸分析。APCI是在大氣壓下利用電暈放電來使氣相樣品和流動相電離的一種離子化技術(shù),要求樣品有一定的揮發(fā)性,適用于非極性或低、中等極性的化合物。由于極少形成多電荷離子,分析的分子量范圍受到質(zhì)量分析器質(zhì)量范圍的限制。APPI是用紫外燈取代APCI的電暈放電,利用光化作用將氣相中的樣品電離的離子化技術(shù),適用于非極性化合物。由于大氣壓電離源是獨立于高真空狀態(tài)的質(zhì)量分析器之外的,故不同大氣壓電離源之間的切換非常方便。
6. 基質(zhì)輔助激光解吸離子化(MALDI):
將溶于適當(dāng)基質(zhì)中的樣品涂布于金屬靶上,用高強度的紫外或紅外脈沖激光照射可實現(xiàn)樣品的離子化。此方式主要用于可達100000Da質(zhì)量的大分子分析,僅限于作為飛行時間分析器的離子源使用。
7. 電感耦合等離子體離子化(ICP):
等離子體是由自由電子、離子和中性原子或分子組成,總體上成電中性的氣體,其內(nèi)部溫度高達幾千至一萬度。樣品由載氣攜帶從等離子體焰炬中央穿過,迅速被蒸發(fā)電離并通過離子引出接口導(dǎo)入到質(zhì)量分析器。樣品在極高溫度下完全蒸發(fā)和解離,電離的百分比高,因此幾乎對所有元素均有較高的檢測靈敏度。由于該條件下化合物分子結(jié)構(gòu)已經(jīng)被破壞,所以ICP僅適用于元素分析。
質(zhì)量分析器將帶電離子根據(jù)其質(zhì)荷比加以分離,用于紀(jì)錄各種離子的質(zhì)量數(shù)和豐度。質(zhì)量分析器的兩個主要技術(shù)參數(shù)是所能測定的質(zhì)荷比的范圍(質(zhì)量范圍)和分辨率。
1. 扇形磁分析器
離子源中生成的離子通過扇形磁場和狹縫聚焦形成離子束。離子離開離子源后,進入垂直于其前進方向的磁場。不同質(zhì)荷比的離子在磁場的作用下,前進方向產(chǎn)生不同的偏轉(zhuǎn),從而使離子束發(fā)散。由于不同質(zhì)荷比的離子在扇形磁場中有其特有的運動曲率半徑,通過改變磁場強度,檢測依次通過狹縫出口的離子,從而實現(xiàn)離子的空間分離,形成質(zhì)譜。
2. 四極桿分析器
因其由四根平行的棒狀電極組成而得名。離子束在與棒狀電極平行的軸上聚焦,一個直流固定電壓(DC)和一個射頻電壓(RF)作用在棒狀電極上,兩對電極之間的電位相反。對于給定的直流和射頻電壓,特定質(zhì)荷比的離子在軸向穩(wěn)定運動,其他質(zhì)荷比的離子則與電極碰撞湮滅。將DC和RF以固定的斜率變化,可以實現(xiàn)質(zhì)譜掃描功能。四極桿分析器對選擇離子分析具有較高的靈敏度。
3. 離子阱分析器
由兩個端蓋電極和位于它們之間的類似四極桿的環(huán)電極構(gòu)成。端蓋電極施加直流電壓或接地,環(huán)電極施加射頻電壓(RF),通過施加適當(dāng)電壓就可以形成一個勢能阱(離子阱)。根據(jù)RF電壓的大小,離子阱就可捕獲某一質(zhì)量范圍的離子。離子阱可以儲存離子,待離子累積到一定數(shù)量后,升高環(huán)電極上的RF電壓,離子按質(zhì)量從高到低的次序依次離開離子阱,被電子倍增監(jiān)測器檢測。目前離子阱分析器已發(fā)展到可以分析質(zhì)荷比高達數(shù)千的離子。離子阱在全掃描模式下仍然具有較高靈敏度,而且單個離子阱通過時間序列的設(shè)定就可以實現(xiàn)多級質(zhì)譜(MSn)的功能。
4. 飛行時間分析器
具有相同動能,不同質(zhì)量的離子,因其飛行速度不同而分離。如果固定離子飛行距離,則不同質(zhì)量離子的飛行時間不同,質(zhì)量小的離子飛行時間短而首先到達檢測器。各種離子的飛行時間與質(zhì)荷比的平方根成正比。離子以離散包的形式引入質(zhì)譜儀,這樣可以統(tǒng)一飛行的起點,依次測量飛行時間。離子包通過一個脈沖或者一個柵系統(tǒng)連續(xù)產(chǎn)生,但只在一特定的時間引入飛行管。新發(fā)展的飛行時間分析器具有大的質(zhì)量分析范圍和較高的質(zhì)量分辨率,尤其適合蛋白等生物大分子分析。
5. 傅里葉變換分析器
在一定強度的磁場中,離子做圓周運動,離子運行軌道受共振變換電場限制。當(dāng)變換電場頻率和回旋頻率相同時,離子穩(wěn)定加速,運動軌道半徑越來越大,動能也越來越大。當(dāng)電場消失時,沿軌道飛行的離子在電極上產(chǎn)生交變電流。對信號頻率進行分析可得出離子質(zhì)量。將時間與相應(yīng)的頻率譜利用計算機經(jīng)過傅里葉變換形成質(zhì)譜。其優(yōu)點為分辨率很高,質(zhì)荷比可以精確到千分之一道爾頓。
1. 串聯(lián)質(zhì)譜
兩個或更多的質(zhì)譜連接在一起,稱為串聯(lián)質(zhì)譜。最簡單的串聯(lián)質(zhì)譜(MS/MS)由兩個質(zhì)譜串聯(lián)而成,其中第一個質(zhì)量分析器(MS1)將離子預(yù)分離或加能量修飾,由第二級質(zhì)量分析器(MS2)分析結(jié)果。最常見的串聯(lián)質(zhì)譜為三級四極桿串聯(lián)質(zhì)譜。第一級和第三級四極桿分析器分別為MS1和MS2,第二級四極桿分析器所起作用是將從MS1得到的各個峰進行轟擊,實現(xiàn)母離子碎裂后進入MS2再行分析?,F(xiàn)在出現(xiàn)了多種質(zhì)量分析器組成的串聯(lián)質(zhì)譜,如四極桿-飛行時間串聯(lián)質(zhì)譜(Q-TOF)和飛行時間-飛行時間(TOF-TOF)串聯(lián)質(zhì)譜等,大大擴展了應(yīng)用范圍。離子阱和傅里葉變換分析器可在不同時間順序?qū)崿F(xiàn)時間序列多級質(zhì)譜掃描功能。MS/MS最基本的功能包括能說明MS1中的母離子和MS2中的子離子間的聯(lián)系。根據(jù)MS1和MS2的掃描模式,如子離子掃描、母離子掃描和中性碎片丟失掃描,可以查明不同質(zhì)量數(shù)離子間的關(guān)系。母離子的碎裂可以通過以下方式實現(xiàn):碰撞誘導(dǎo)解離,表面誘導(dǎo)解離和激光誘導(dǎo)解離。不用激發(fā)即可解離則稱為亞穩(wěn)態(tài)分解。MS/MS在混合物分析中有很多優(yōu)勢。在質(zhì)譜與氣相色譜或液相色譜聯(lián)用時,即使色譜未能將物質(zhì)完全分離,也可以進行鑒定。MS/MS可從樣品中選擇母離子進行分析,而不受其他物質(zhì)干擾。MS/MS在藥物領(lǐng)域有很多應(yīng)用。子離子掃描可獲得藥物主要成分,雜質(zhì)和其他物質(zhì)的母離子的定性信息,有助于未知物的鑒別,也可用于肽和蛋白質(zhì)氨基酸序列的鑒別。在藥物代謝動力學(xué)研究中,對生物復(fù)雜基質(zhì)中低濃度樣品進行定量分析,可用多反應(yīng)監(jiān)測模式(multiple reaction monitoring,MRM)消除干擾。如分析藥物中某特定離子,而來自基質(zhì)中其他化合物的信號可能會掩蓋檢測信號,用MS1/MS2對特定離子的碎片進行選擇監(jiān)測可以消除干擾。MRM也可同時定量分析多個化合物。在藥物代謝研究中,為發(fā)現(xiàn)與代謝前物質(zhì)具有相同結(jié)構(gòu)特征的分子,使用中性碎片丟失掃描能找到所有丟失同種功能團的離子,如羧酸丟失中性二氧化碳。如果丟失的碎片是離子形式,則母離子掃描能找到所有丟失這種碎片的離子。
2. 聯(lián)用技術(shù)
色譜可作為質(zhì)譜的樣品導(dǎo)入裝置,并對樣品進行初步分離純化,因此色譜/質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)可對復(fù)雜體系進行分離分析。因為色譜可得到化合物的保留時間,質(zhì)譜可給出化合物的分子量和結(jié)構(gòu)信息,故對復(fù)雜體系或混合物中化合物的鑒別和測定非常有效。在這些聯(lián)用技術(shù)中,芯片/質(zhì)譜聯(lián)用(Chip/MS)顯示了良好前景,但目前尚不成熟,而氣相色譜/質(zhì)譜聯(lián)用和液相色譜/質(zhì)譜聯(lián)用等已經(jīng)廣泛用于藥物分析。
(1) 氣相色譜/質(zhì)譜聯(lián)用(GC/MS)
氣相色譜的流出物已經(jīng)是氣相狀態(tài),可直接導(dǎo)入質(zhì)譜。由于氣相色譜與質(zhì)譜的工作壓力相差幾個數(shù)量級,開始聯(lián)用時在它們之間使用了各種氣體分離器以解決工作壓力的差異。隨著毛細(xì)管氣相色譜的應(yīng)用和高速真空泵的使用,現(xiàn)在氣相色譜流出物已可直接導(dǎo)入質(zhì)譜。
(2) 液相色譜/質(zhì)譜聯(lián)用(HPLC/MS)
液相色譜/質(zhì)譜聯(lián)用的接口前已論及,主要用于分析GC/MS不能分析,或熱穩(wěn)定性差,強極性和高分子量的物質(zhì),如生物樣品(藥物與其代謝產(chǎn)物)和生物大分子(肽、蛋白、核酸和多糖)。
(3) 毛細(xì)管電泳/質(zhì)譜聯(lián)用(CE/MS)和芯片/質(zhì)譜聯(lián)用(Chip/MS)
毛細(xì)管電泳(CE)適用于分離分析極微量樣品(nl體積)和特定用途(如手性對映體分離等)。CE流出物可直接導(dǎo)入質(zhì)譜,或加入輔助流動相以達到和質(zhì)譜儀相匹配。微流控芯片技術(shù)是近年來發(fā)展迅速,可實現(xiàn)分離、過濾、衍生等多種實驗室技術(shù)于一塊芯片上的微型化技術(shù),具有高通量、微型化等優(yōu)點,目前也已實現(xiàn)芯片和質(zhì)譜聯(lián)用,但尚未商品化。
(4) 超臨界流體色譜/質(zhì)譜聯(lián)用(SFC/MS)
常用超臨界流體二氧化碳作流動相的SFC適用于小極性和中等極性物質(zhì)的分離分析,通過色譜柱和離子源之間的分離器可實現(xiàn)SFC和MS聯(lián)用。
(5) 等離子體發(fā)射光譜/質(zhì)譜聯(lián)用(ICP/MS)
由ICP作為離子源和MS實現(xiàn)聯(lián)用,主要用于元素分析和元素形態(tài)分析。
檢測器通常為光電倍增器或電子倍增器,所采集的信號經(jīng)放大并轉(zhuǎn)化為數(shù)字信號,計算機進行處理后得到質(zhì)譜圖。
質(zhì)譜離子的多少用豐度表示(abundance)表示,即具有某質(zhì)荷比離子的數(shù)量。由于某個具體離子的“數(shù)量”無法測定,故一般用相對豐度表示其強度,即最強的峰叫基峰(base peak),其他離子的豐度用相對于基峰的百分?jǐn)?shù)表示。
在質(zhì)譜儀測定的質(zhì)量范圍內(nèi),由離子的質(zhì)荷比和其相對豐度構(gòu)成質(zhì)譜圖。在LC/MS和GC/MS中,常用各分析物質(zhì)的色譜保留時間和由質(zhì)譜得到其離子的相對強度組成色譜總離子流圖。也可確定某固定的質(zhì)荷比,對整個色譜流出物進行選擇離子檢測(selected ion monitoring, SIM),得到選擇離子流圖。
質(zhì)譜儀分離離子的能力稱為分辨率,通常定義為高度相同的相鄰兩峰,當(dāng)兩峰的峰谷高度為峰高的10%時,兩峰質(zhì)量的平均值與它們的質(zhì)量差的比值。對于低、中、高分辨率的質(zhì)譜,分別是指其分辨率在100~2000、2000~10000和10000以上。
質(zhì)譜在藥物領(lǐng)域的主要應(yīng)用為藥物的定性鑒別、定量分析和結(jié)構(gòu)解析。
如果一個中性分子丟失或得到一個電子,則分子離子的質(zhì)荷比與該分子質(zhì)量數(shù)相同。使用高分辨率質(zhì)譜可得到離子的精確質(zhì)量數(shù),然后計算出該化合物的分子式,或者用參照物作峰匹配可以確證分子量和分子式。分子離子的各種化學(xué)鍵發(fā)生斷裂后形成碎片離子,由此可推斷其裂解方式,得到相應(yīng)的結(jié)構(gòu)信息。
質(zhì)譜用于定量分析,其選擇性、精度和準(zhǔn)確度較高?;衔锿ㄟ^直接進樣或利用氣相色譜和液相色譜分離純化后再導(dǎo)入質(zhì)譜。質(zhì)譜定量分析用外標(biāo)法或內(nèi)標(biāo)法,后者精度高于前者。定量分析中的內(nèi)標(biāo)可選用類似結(jié)構(gòu)物質(zhì)或同位素物質(zhì)。前者成本低,但精度和準(zhǔn)確度以使用同位素物質(zhì)為高。使用同位素物質(zhì)為內(nèi)標(biāo)時,要求在進樣、分離和離子化過程中不會丟失同位素物質(zhì)。在使用FAB質(zhì)譜和LC/MS(熱噴霧和電噴霧)進行定量分析時,一般都需要用穩(wěn)定的同位素內(nèi)標(biāo)。分析物和內(nèi)標(biāo)離子的相對豐度采用選擇離子監(jiān)測(只監(jiān)測分析物和內(nèi)標(biāo)的特定離子)的方式測定。選擇離子監(jiān)測相對全范圍掃描而言,由于離子流積分時間長而增加了選擇性和靈敏度。利用分析物和內(nèi)標(biāo)的色譜峰面積或峰高比得出校正曲線,然后計算樣品中分析物的色譜峰面積或它的量。
質(zhì)譜法是將被測物質(zhì)離子化,按離子的質(zhì)荷比分離,測量各種離子譜峰的強度而實現(xiàn)分析目的的一種分析方法。質(zhì)量是物質(zhì)的固有特征之一,不同的物質(zhì)有不同的質(zhì)量譜——質(zhì)譜,利用這一性質(zhì),可以進行定性分析(包括分子質(zhì)量和相關(guān)結(jié)構(gòu)信息);譜峰強度也與它代表的化合物含量有關(guān),可以用于定量分析。質(zhì)譜儀一般由四部分組成:進樣系統(tǒng)——按電離方式的需要,將樣品送入離子源的適當(dāng)部位;離子源——用來使樣品分子電離生成離子,并使生成的離子會聚成有一定能量和幾何形狀的離子束;質(zhì)量分析器——利用電磁場(包括磁場、磁場和電場的組合、高頻電場、和高頻脈沖電場等)的作用將來自離子源的離子束中不同質(zhì)荷比的離子按空間位置,時間先后或運動軌道穩(wěn)定與否等形式進行分離;檢測器——用來接受、檢測和記錄被分離后的離子信號。一般情況下,進樣系統(tǒng)將待測物在不破壞系統(tǒng)真空的情況下導(dǎo)入離子源(10-6~10-8mmHg),離子化后由質(zhì)量分析器分離再檢測;計算機系統(tǒng)對儀器進行控制、采集和處理數(shù)據(jù),并可將質(zhì)譜圖與數(shù)據(jù)庫中的譜圖進行比較。
一、 進樣系統(tǒng)和接口技術(shù)將樣品導(dǎo)入質(zhì)譜儀可分為直接進樣和通過接口兩種方式實現(xiàn)
1. 直接進樣:
在室溫和常壓下,氣態(tài)或液態(tài)樣品可通過一個可調(diào)噴口裝置以中性流的形式導(dǎo)入離子源。吸附在固體上或溶解在液體中的揮發(fā)性物質(zhì)可通過頂空分析器進行富集,利用吸附柱捕集,再采用程序升溫的方式使之解吸,經(jīng)毛細(xì)管導(dǎo)入質(zhì)譜儀。對于固體樣品,常用進樣桿直接導(dǎo)入。將樣品置于進樣桿頂部的小坩堝中,通過在離子源附近的真空環(huán)境中加熱的方式導(dǎo)入樣品,或者可通過在離子化室中將樣品從一可迅速加熱的金屬絲上解吸或者使用激光輔助解吸的方式進行。這種方法可與電子轟擊電離、化學(xué)電離以及場電離結(jié)合,適用于熱穩(wěn)定性差或者難揮發(fā)物的分析。目前質(zhì)譜進樣系統(tǒng)發(fā)展較快的是多種液相色譜/質(zhì)譜聯(lián)用的接口技術(shù),用以將色譜流出物導(dǎo)入質(zhì)譜,經(jīng)離子化后供質(zhì)譜分析。主要技術(shù)包括各種噴霧技術(shù)(電噴霧,熱噴霧和離子噴霧);傳送裝置(粒子束)和粒子誘導(dǎo)解吸(快原子轟擊)等。
2. 電噴霧接口:
帶有樣品的色譜流動相通過一個帶有數(shù)千伏高壓的針尖噴口噴出,生成帶電液滴,經(jīng)干燥氣除去溶劑后,帶電離子通過毛細(xì)管或者小孔直接進入質(zhì)量分析器。傳統(tǒng)的電噴霧接口只適用于流動相流速為1~5μl/min的體系,因此電噴霧接口主要適用于微柱液相色譜。同時由于離子可以帶多電荷,使得高分子物質(zhì)的質(zhì)荷比落入大多數(shù)四極桿或磁質(zhì)量分析器的分析范圍(質(zhì)荷比小于4000),從而可分析分子量高達幾十萬道爾頓(Da)的物質(zhì)。
3. 熱噴霧接口:
存在于揮發(fā)性緩沖液流動相(如乙酸銨溶液)中的待測物,由細(xì)徑管導(dǎo)入離子源,同時加熱,溶劑在細(xì)徑管中除去,待測物進入氣相。其中性分子可以通過與氣相中的緩沖液離子(如NH4+)反應(yīng),以化學(xué)電離的方式離子化,再被導(dǎo)入質(zhì)量分析器。熱噴霧接口適用的液體流量可達2ml/min,并適合于含有大量水的流動相,可用于測定各種極性化合物。由于在溶劑揮發(fā)時需要利用較高溫度加熱,因此待測物有可能受熱分解。
4. 離子噴霧接口:
在電噴霧接口基礎(chǔ)上,利用氣體輔助進行噴霧,可提高流動相流速達到1ml/min。電噴霧和離子噴霧技術(shù)中使用的流動相體系含有的緩沖液必須是揮發(fā)性的。
5. 粒子束接口:
將色譜流出物轉(zhuǎn)化為氣溶膠,于脫溶劑室脫去溶劑,得到的中性待測物分子導(dǎo)入離子源,使用電子轟擊或者化學(xué)電離的方式將其離子化,獲得的質(zhì)譜為經(jīng)典的電子轟擊電離或者化學(xué)電離質(zhì)譜圖,其中前者含有豐富的樣品分子結(jié)構(gòu)信息。但粒子束接口對樣品的極性,熱穩(wěn)定性和分子質(zhì)量有一定限制,最適用于分子量在1000Da以下的有機小分子測定。
6. 解吸附技術(shù):
將微柱液相色譜與粒子誘導(dǎo)解吸技術(shù)(快原子轟擊,液相二次粒子質(zhì)譜)結(jié)合,一般使用的流速在1~10μl/min之間,流動相須加入微量難揮發(fā)液體(如甘油)?;旌弦后w通過一根毛細(xì)管流到置于離子源中的金屬靶上,經(jīng)溶劑揮發(fā)后形成的液膜被高能原子或者離子轟擊而離子化。得到的質(zhì)譜圖與快原子轟擊或者液相二次離子質(zhì)譜的質(zhì)譜圖類似,但是本底卻大大降低。
二、 離子源
離子源的性能決定了離子化效率,很大程度上決定了質(zhì)譜儀的靈敏度。常見的離子化方式有兩種:一種是樣品在離子源中以氣體的形式被離子化,另一種為從固體表面或溶液中濺射出帶電離子。在很多情況下進樣和離子化同時進行。
1. 電子轟擊電離(EI):
氣化后的樣品分子進入離子化室后,受到由鎢或錸燈絲發(fā)射并加速的電子流的轟擊產(chǎn)生正離子。離子化室壓力保持在10-4~10-6mmHg。轟擊電子的能量大于樣品分子的電離能,使樣品分子電離或碎裂。電子轟擊質(zhì)譜能提供有機化合物最豐富的結(jié)構(gòu)信息,有較好的重現(xiàn)性,其裂解規(guī)律的研究也最為完善,已經(jīng)建立了數(shù)萬種有機化合物的標(biāo)準(zhǔn)譜圖庫可供檢索。其缺點在于不適用于難揮發(fā)和熱穩(wěn)定性差的樣品。
2. 化學(xué)電離(CI):
引入一定壓力的反應(yīng)氣進入離子化室,反應(yīng)氣在具有一定能量的電子流的作用下電離或者裂解。生成的離子和反應(yīng)氣分子進一步反應(yīng)或與樣品分子發(fā)生離子分子反應(yīng),通過質(zhì)子交換使樣品分子電離。常用的反應(yīng)氣有甲烷,異丁烷和氨氣?;瘜W(xué)電離通常得到準(zhǔn)分子離子,如果樣品分子的質(zhì)子親和勢大于反應(yīng)氣的質(zhì)子親和勢,則生成〔M+H〕+,反之則生成〔M-H〕+。根據(jù)反應(yīng)氣壓力不同,化學(xué)電離源分為大氣壓、中氣壓(0.1~10mmHg)和低氣壓(10-6mmHg)三種。大氣壓化學(xué)電離源適合于色譜和質(zhì)譜聯(lián)用,檢測靈敏度較一般的化學(xué)電離源要高2~3個數(shù)量級,低氣壓化學(xué)電離源可以在較低的溫度下分析難揮發(fā)的樣品,并能使用難揮發(fā)的反應(yīng)試劑,但是只能用于傅里葉變換質(zhì)譜儀。
3. 快原子轟擊(FAB):
將樣品分散于基質(zhì)(常用甘油等高沸點溶劑)制成溶液,涂布于金屬靶上送入FAB離子源中。將經(jīng)強電場加速后的惰性氣體中性原子束(如氙)對準(zhǔn)靶上樣品轟擊。基質(zhì)中存在的締合離子及經(jīng)快原子轟擊產(chǎn)生的樣品離子一起被濺射進入氣相,并在電場作用下進入質(zhì)量分析器。如用惰性氣體離子束(如銫或氬)來取代中性原子束進行轟擊,所得質(zhì)譜稱為液相二次離子質(zhì)譜(LSIMS)。此法優(yōu)點在于離子化能力強,可用于強極性、揮發(fā)性低、熱穩(wěn)定性差和相對分子質(zhì)量大的樣品及EI和CI難于得到有意義的質(zhì)譜的樣品。FAB比EI容易得到比較強的分子離子或準(zhǔn)分子離子;不同于CI的一個優(yōu)勢在于其所得質(zhì)譜有較多的碎片離子峰信息,有助于結(jié)構(gòu)解析。缺點是對非極性樣品靈敏度下降,而且基質(zhì)在低質(zhì)量數(shù)區(qū)(400以下)產(chǎn)生較多干擾峰。FAB是一種表面分析技術(shù),需注意優(yōu)化表面狀況的樣品處理過程。樣品分子與堿金屬離子加合,如〔M+Na〕和〔M+K〕,有助于形成離子。這種現(xiàn)象有助于生物分子的離子化。因此,使用氯化鈉溶液對樣品表面進行處理有助于提高加合離子的產(chǎn)率。在分析過程中加熱樣品也有助于提高產(chǎn)率。在FAB離子化過程中,可同時生成正負(fù)離子,這兩種離子都可以用質(zhì)譜進行分析。樣品分子如帶有強電子捕獲結(jié)構(gòu),特別是帶有鹵原子,可以產(chǎn)生大量的負(fù)離子。負(fù)離子質(zhì)譜已成功用于農(nóng)藥殘留物的分析。
4. 場電離(field ionization,F(xiàn)I)和場解吸(field desorption,F(xiàn)D):
FI離子源由距離很近的陽極和陰極組成,兩極間加上高電壓后,陽極附近產(chǎn)生高達10+7~10+8V/cm的強電場。接近陽極的氣態(tài)樣品分子產(chǎn)生電離形成正分子離子,然后加速進入質(zhì)量分析器。對于液體樣品(固體樣品先溶于溶劑)可用FD來實現(xiàn)離子化。將金屬絲浸入樣品液,待溶劑揮發(fā)后把金屬絲作為發(fā)射體送入離子源,通過弱電流提供樣品解吸附所需能量,樣品分子即向高場強的發(fā)射區(qū)擴散并實現(xiàn)離子化。FD適用于難氣化,熱穩(wěn)定性差的化合物。FI和FD均易得到分子離子峰。
5. 大氣壓電離源(API):
API是液相色譜/質(zhì)譜聯(lián)用儀最常用的離子化方式。常見的大氣壓電離源有三種:大氣壓電噴霧(APESI),大氣壓化學(xué)電離(APCI)和大氣壓光電離(APPI)。電噴霧離子化是從去除溶劑后的帶電液滴形成離子的過程,適用于容易在溶液中形成離子的樣品或極性化合物。因具有多電荷能力,所以其分析的分子量范圍很大,既可用于小分子分析,又可用于多肽、蛋白質(zhì)和寡聚核苷酸分析。APCI是在大氣壓下利用電暈放電來使氣相樣品和流動相電離的一種離子化技術(shù),要求樣品有一定的揮發(fā)性,適用于非極性或低、中等極性的化合物。由于極少形成多電荷離子,分析的分子量范圍受到質(zhì)量分析器質(zhì)量范圍的限制。APPI是用紫外燈取代APCI的電暈放電,利用光化作用將氣相中的樣品電離的離子化技術(shù),適用于非極性化合物。由于大氣壓電離源是獨立于高真空狀態(tài)的質(zhì)量分析器之外的,故不同大氣壓電離源之間的切換非常方便。
6. 基質(zhì)輔助激光解吸離子化(MALDI):
將溶于適當(dāng)基質(zhì)中的樣品涂布于金屬靶上,用高強度的紫外或紅外脈沖激光照射可實現(xiàn)樣品的離子化。此方式主要用于可達100000Da質(zhì)量的大分子分析,僅限于作為飛行時間分析器的離子源使用。
7. 電感耦合等離子體離子化(ICP):
等離子體是由自由電子、離子和中性原子或分子組成,總體上成電中性的氣體,其內(nèi)部溫度高達幾千至一萬度。樣品由載氣攜帶從等離子體焰炬中央穿過,迅速被蒸發(fā)電離并通過離子引出接口導(dǎo)入到質(zhì)量分析器。樣品在極高溫度下完全蒸發(fā)和解離,電離的百分比高,因此幾乎對所有元素均有較高的檢測靈敏度。由于該條件下化合物分子結(jié)構(gòu)已經(jīng)被破壞,所以ICP僅適用于元素分析。
三、 質(zhì)量分析器
質(zhì)量分析器將帶電離子根據(jù)其質(zhì)荷比加以分離,用于紀(jì)錄各種離子的質(zhì)量數(shù)和豐度。質(zhì)量分析器的兩個主要技術(shù)參數(shù)是所能測定的質(zhì)荷比的范圍(質(zhì)量范圍)和分辨率。
1. 扇形磁分析器
離子源中生成的離子通過扇形磁場和狹縫聚焦形成離子束。離子離開離子源后,進入垂直于其前進方向的磁場。不同質(zhì)荷比的離子在磁場的作用下,前進方向產(chǎn)生不同的偏轉(zhuǎn),從而使離子束發(fā)散。由于不同質(zhì)荷比的離子在扇形磁場中有其特有的運動曲率半徑,通過改變磁場強度,檢測依次通過狹縫出口的離子,從而實現(xiàn)離子的空間分離,形成質(zhì)譜。
2. 四極桿分析器
因其由四根平行的棒狀電極組成而得名。離子束在與棒狀電極平行的軸上聚焦,一個直流固定電壓(DC)和一個射頻電壓(RF)作用在棒狀電極上,兩對電極之間的電位相反。對于給定的直流和射頻電壓,特定質(zhì)荷比的離子在軸向穩(wěn)定運動,其他質(zhì)荷比的離子則與電極碰撞湮滅。將DC和RF以固定的斜率變化,可以實現(xiàn)質(zhì)譜掃描功能。四極桿分析器對選擇離子分析具有較高的靈敏度。
3. 離子阱分析器
由兩個端蓋電極和位于它們之間的類似四極桿的環(huán)電極構(gòu)成。端蓋電極施加直流電壓或接地,環(huán)電極施加射頻電壓(RF),通過施加適當(dāng)電壓就可以形成一個勢能阱(離子阱)。根據(jù)RF電壓的大小,離子阱就可捕獲某一質(zhì)量范圍的離子。離子阱可以儲存離子,待離子累積到一定數(shù)量后,升高環(huán)電極上的RF電壓,離子按質(zhì)量從高到低的次序依次離開離子阱,被電子倍增監(jiān)測器檢測。目前離子阱分析器已發(fā)展到可以分析質(zhì)荷比高達數(shù)千的離子。離子阱在全掃描模式下仍然具有較高靈敏度,而且單個離子阱通過時間序列的設(shè)定就可以實現(xiàn)多級質(zhì)譜(MSn)的功能。
4. 飛行時間分析器
具有相同動能,不同質(zhì)量的離子,因其飛行速度不同而分離。如果固定離子飛行距離,則不同質(zhì)量離子的飛行時間不同,質(zhì)量小的離子飛行時間短而首先到達檢測器。各種離子的飛行時間與質(zhì)荷比的平方根成正比。離子以離散包的形式引入質(zhì)譜儀,這樣可以統(tǒng)一飛行的起點,依次測量飛行時間。離子包通過一個脈沖或者一個柵系統(tǒng)連續(xù)產(chǎn)生,但只在一特定的時間引入飛行管。新發(fā)展的飛行時間分析器具有大的質(zhì)量分析范圍和較高的質(zhì)量分辨率,尤其適合蛋白等生物大分子分析。
5. 傅里葉變換分析器
在一定強度的磁場中,離子做圓周運動,離子運行軌道受共振變換電場限制。當(dāng)變換電場頻率和回旋頻率相同時,離子穩(wěn)定加速,運動軌道半徑越來越大,動能也越來越大。當(dāng)電場消失時,沿軌道飛行的離子在電極上產(chǎn)生交變電流。對信號頻率進行分析可得出離子質(zhì)量。將時間與相應(yīng)的頻率譜利用計算機經(jīng)過傅里葉變換形成質(zhì)譜。其優(yōu)點為分辨率很高,質(zhì)荷比可以精確到千分之一道爾頓。
四、 串聯(lián)質(zhì)譜及聯(lián)用技術(shù)
1. 串聯(lián)質(zhì)譜
兩個或更多的質(zhì)譜連接在一起,稱為串聯(lián)質(zhì)譜。最簡單的串聯(lián)質(zhì)譜(MS/MS)由兩個質(zhì)譜串聯(lián)而成,其中第一個質(zhì)量分析器(MS1)將離子預(yù)分離或加能量修飾,由第二級質(zhì)量分析器(MS2)分析結(jié)果。最常見的串聯(lián)質(zhì)譜為三級四極桿串聯(lián)質(zhì)譜。第一級和第三級四極桿分析器分別為MS1和MS2,第二級四極桿分析器所起作用是將從MS1得到的各個峰進行轟擊,實現(xiàn)母離子碎裂后進入MS2再行分析?,F(xiàn)在出現(xiàn)了多種質(zhì)量分析器組成的串聯(lián)質(zhì)譜,如四極桿-飛行時間串聯(lián)質(zhì)譜(Q-TOF)和飛行時間-飛行時間(TOF-TOF)串聯(lián)質(zhì)譜等,大大擴展了應(yīng)用范圍。離子阱和傅里葉變換分析器可在不同時間順序?qū)崿F(xiàn)時間序列多級質(zhì)譜掃描功能。MS/MS最基本的功能包括能說明MS1中的母離子和MS2中的子離子間的聯(lián)系。根據(jù)MS1和MS2的掃描模式,如子離子掃描、母離子掃描和中性碎片丟失掃描,可以查明不同質(zhì)量數(shù)離子間的關(guān)系。母離子的碎裂可以通過以下方式實現(xiàn):碰撞誘導(dǎo)解離,表面誘導(dǎo)解離和激光誘導(dǎo)解離。不用激發(fā)即可解離則稱為亞穩(wěn)態(tài)分解。MS/MS在混合物分析中有很多優(yōu)勢。在質(zhì)譜與氣相色譜或液相色譜聯(lián)用時,即使色譜未能將物質(zhì)完全分離,也可以進行鑒定。MS/MS可從樣品中選擇母離子進行分析,而不受其他物質(zhì)干擾。MS/MS在藥物領(lǐng)域有很多應(yīng)用。子離子掃描可獲得藥物主要成分,雜質(zhì)和其他物質(zhì)的母離子的定性信息,有助于未知物的鑒別,也可用于肽和蛋白質(zhì)氨基酸序列的鑒別。在藥物代謝動力學(xué)研究中,對生物復(fù)雜基質(zhì)中低濃度樣品進行定量分析,可用多反應(yīng)監(jiān)測模式(multiple reaction monitoring,MRM)消除干擾。如分析藥物中某特定離子,而來自基質(zhì)中其他化合物的信號可能會掩蓋檢測信號,用MS1/MS2對特定離子的碎片進行選擇監(jiān)測可以消除干擾。MRM也可同時定量分析多個化合物。在藥物代謝研究中,為發(fā)現(xiàn)與代謝前物質(zhì)具有相同結(jié)構(gòu)特征的分子,使用中性碎片丟失掃描能找到所有丟失同種功能團的離子,如羧酸丟失中性二氧化碳。如果丟失的碎片是離子形式,則母離子掃描能找到所有丟失這種碎片的離子。
2. 聯(lián)用技術(shù)
色譜可作為質(zhì)譜的樣品導(dǎo)入裝置,并對樣品進行初步分離純化,因此色譜/質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)可對復(fù)雜體系進行分離分析。因為色譜可得到化合物的保留時間,質(zhì)譜可給出化合物的分子量和結(jié)構(gòu)信息,故對復(fù)雜體系或混合物中化合物的鑒別和測定非常有效。在這些聯(lián)用技術(shù)中,芯片/質(zhì)譜聯(lián)用(Chip/MS)顯示了良好前景,但目前尚不成熟,而氣相色譜/質(zhì)譜聯(lián)用和液相色譜/質(zhì)譜聯(lián)用等已經(jīng)廣泛用于藥物分析。
(1) 氣相色譜/質(zhì)譜聯(lián)用(GC/MS)
氣相色譜的流出物已經(jīng)是氣相狀態(tài),可直接導(dǎo)入質(zhì)譜。由于氣相色譜與質(zhì)譜的工作壓力相差幾個數(shù)量級,開始聯(lián)用時在它們之間使用了各種氣體分離器以解決工作壓力的差異。隨著毛細(xì)管氣相色譜的應(yīng)用和高速真空泵的使用,現(xiàn)在氣相色譜流出物已可直接導(dǎo)入質(zhì)譜。
(2) 液相色譜/質(zhì)譜聯(lián)用(HPLC/MS)
液相色譜/質(zhì)譜聯(lián)用的接口前已論及,主要用于分析GC/MS不能分析,或熱穩(wěn)定性差,強極性和高分子量的物質(zhì),如生物樣品(藥物與其代謝產(chǎn)物)和生物大分子(肽、蛋白、核酸和多糖)。
(3) 毛細(xì)管電泳/質(zhì)譜聯(lián)用(CE/MS)和芯片/質(zhì)譜聯(lián)用(Chip/MS)
毛細(xì)管電泳(CE)適用于分離分析極微量樣品(nl體積)和特定用途(如手性對映體分離等)。CE流出物可直接導(dǎo)入質(zhì)譜,或加入輔助流動相以達到和質(zhì)譜儀相匹配。微流控芯片技術(shù)是近年來發(fā)展迅速,可實現(xiàn)分離、過濾、衍生等多種實驗室技術(shù)于一塊芯片上的微型化技術(shù),具有高通量、微型化等優(yōu)點,目前也已實現(xiàn)芯片和質(zhì)譜聯(lián)用,但尚未商品化。
(4) 超臨界流體色譜/質(zhì)譜聯(lián)用(SFC/MS)
常用超臨界流體二氧化碳作流動相的SFC適用于小極性和中等極性物質(zhì)的分離分析,通過色譜柱和離子源之間的分離器可實現(xiàn)SFC和MS聯(lián)用。
(5) 等離子體發(fā)射光譜/質(zhì)譜聯(lián)用(ICP/MS)
由ICP作為離子源和MS實現(xiàn)聯(lián)用,主要用于元素分析和元素形態(tài)分析。
五、數(shù)據(jù)處理和應(yīng)用
檢測器通常為光電倍增器或電子倍增器,所采集的信號經(jīng)放大并轉(zhuǎn)化為數(shù)字信號,計算機進行處理后得到質(zhì)譜圖。
質(zhì)譜離子的多少用豐度表示(abundance)表示,即具有某質(zhì)荷比離子的數(shù)量。由于某個具體離子的“數(shù)量”無法測定,故一般用相對豐度表示其強度,即最強的峰叫基峰(base peak),其他離子的豐度用相對于基峰的百分?jǐn)?shù)表示。
在質(zhì)譜儀測定的質(zhì)量范圍內(nèi),由離子的質(zhì)荷比和其相對豐度構(gòu)成質(zhì)譜圖。在LC/MS和GC/MS中,常用各分析物質(zhì)的色譜保留時間和由質(zhì)譜得到其離子的相對強度組成色譜總離子流圖。也可確定某固定的質(zhì)荷比,對整個色譜流出物進行選擇離子檢測(selected ion monitoring, SIM),得到選擇離子流圖。
質(zhì)譜儀分離離子的能力稱為分辨率,通常定義為高度相同的相鄰兩峰,當(dāng)兩峰的峰谷高度為峰高的10%時,兩峰質(zhì)量的平均值與它們的質(zhì)量差的比值。對于低、中、高分辨率的質(zhì)譜,分別是指其分辨率在100~2000、2000~10000和10000以上。
質(zhì)譜在藥物領(lǐng)域的主要應(yīng)用為藥物的定性鑒別、定量分析和結(jié)構(gòu)解析。
如果一個中性分子丟失或得到一個電子,則分子離子的質(zhì)荷比與該分子質(zhì)量數(shù)相同。使用高分辨率質(zhì)譜可得到離子的精確質(zhì)量數(shù),然后計算出該化合物的分子式,或者用參照物作峰匹配可以確證分子量和分子式。分子離子的各種化學(xué)鍵發(fā)生斷裂后形成碎片離子,由此可推斷其裂解方式,得到相應(yīng)的結(jié)構(gòu)信息。
質(zhì)譜用于定量分析,其選擇性、精度和準(zhǔn)確度較高?;衔锿ㄟ^直接進樣或利用氣相色譜和液相色譜分離純化后再導(dǎo)入質(zhì)譜。質(zhì)譜定量分析用外標(biāo)法或內(nèi)標(biāo)法,后者精度高于前者。定量分析中的內(nèi)標(biāo)可選用類似結(jié)構(gòu)物質(zhì)或同位素物質(zhì)。前者成本低,但精度和準(zhǔn)確度以使用同位素物質(zhì)為高。使用同位素物質(zhì)為內(nèi)標(biāo)時,要求在進樣、分離和離子化過程中不會丟失同位素物質(zhì)。在使用FAB質(zhì)譜和LC/MS(熱噴霧和電噴霧)進行定量分析時,一般都需要用穩(wěn)定的同位素內(nèi)標(biāo)。分析物和內(nèi)標(biāo)離子的相對豐度采用選擇離子監(jiān)測(只監(jiān)測分析物和內(nèi)標(biāo)的特定離子)的方式測定。選擇離子監(jiān)測相對全范圍掃描而言,由于離子流積分時間長而增加了選擇性和靈敏度。利用分析物和內(nèi)標(biāo)的色譜峰面積或峰高比得出校正曲線,然后計算樣品中分析物的色譜峰面積或它的量。
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引用 刪除 troy.tper.lee / 2008-05-11 11:38:28
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不錯,挺全面的.
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引用 刪除 troy.tper.lee / 2008-05-11 11:37:43
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評 5 分