HPLC法測定紅景天茶中紅景天苷的含量
1、儀器與試劑試藥
儀器:Waters2695液相色譜系統(tǒng):四單元數(shù)碼梯度泵、在線真空脫氣機、自動進樣器、柱溫箱、Wa—ters2487VWD檢測 器;METI'LERTOLEDOAX205(瑞士)十萬分之一天平;BPl21S萬分之一天平(德國塞托利斯公司)。試藥試劑:紅景天茶(批 號:060914.060915,060916);紅景天苷對照品(批號:110818-200404。購于中國藥品生物制品檢定所);甲醇、乙腈為色譜 純,水為高純水,其它試劑均為分析純。
2、方法與結(jié)果
2.1色譜條件色譜柱填充劑為十八烷基硅烷鍵合硅膠,本試驗研究采用WaterssymmetryshieldC18柱 (3.9mm×150mm,5μm);流動相為甲醇一乙腈一水(3:1:96),流速為1.0mL·min~;檢測波長為225nm,柱溫:25~C;理 論塔板數(shù)按紅景天苷峰計算應不低于4000。2.2對照品溶液的制備取紅景天苷對照品適量,加甲醇制成0.06mg·mL的溶液,作為對照品溶液。
2.3供試品溶液的制備取紅景天茶,研細,稱取5g,加入乙醚20mL脫脂,揮干乙醚,加水10mL溶解,裝上已處理好的D101大孔樹脂柱, 用水洗脫至無色,再用60%的乙醇30mL洗脫,收集60%乙醇洗脫液,蒸干,用20%的甲醇溶解,轉(zhuǎn)移至5mL容量瓶中定容至刻度,過濾,作為供試液。
2.4陰性對照溶液的制備取處方量,以相同工藝制備缺紅景天的陰性制劑,依“2.3”項目下方法操作,即得陰性對照液。
2.5專屬性試驗分別取對照品溶液和供試品溶液各10IxL,注入液相色譜儀,記錄色譜圖,結(jié)果為:紅景天苷對照品和供試品色譜圖中紅景天苷峰 與其它組分峰基線分離,分離度大于1.5,保留時間為20.654min;陰性對照色譜圖中與紅景天苷對照以及供試品色譜圖中相對應的保留時間處無色譜峰 出現(xiàn),表明其它組分對紅景天苷的測定無干擾.
2.6線性關(guān)系考察精密稱取40~C干燥至恒重紅景天苷對照品3.44mg,置50mL容量瓶中,加醇溶解并定容至刻度,搖勻(濃度為68.8 叫mL),分別用甲醇稀釋成濃度為34.4、17.2、8.64.30、2.15μg·mL的對照品溶液,各取10進樣,按‘‘2.1”項下色譜條件測 定,以峰面積為縱標,對照品濃度(μg·mL)為橫坐標,繪制標曲線,得回歸方程為:y=13114X+1715.6;R0.9999,紅景天苷在 0.0215~O.6880μg范匪呈良好的線性關(guān)系。
2.7精密度試驗精密吸取同一份供試品溶液續(xù)進樣6次,測定紅景天苷峰面積積分值,RSD為1.3%(n=6)
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