ASTM F2131-02(2007)
使用W-20小鼠基質細胞系的重組人骨形態(tài)發(fā)生蛋白-2（rhBMP-2）體外生物活性的標準試驗方法

Standard Test Method forIn Vitro Biological Activity of Recombinant Human Bone Morphogenetic Protein-2 (rhBMP-2) Using the W-20 Mouse Stromal Cell Line

被代替

標準號

ASTM F2131-02(2007)

發(fā)布

2002年

發(fā)布單位

美國材料與試驗協(xié)會

替代標準

ASTM F2131-02(2007)e1

當前最新

ASTM F2131-21

 

 

適用范圍

1.1 本試驗方法描述了使用小鼠基質細胞系 W-20 克隆 17 (W-20-17) 測定 rhBMP-2 體外生物活性的方法和結果計算。該克隆源自 W++ 小鼠品系的骨髓基質細胞。
1.2 該測試方法（測定）已根據(jù)國際協(xié)調委員會測定驗證指南（實驗室間精度除外）進行了鑒定和驗證，用于評估rhBMP-2 的生物活性。還研究了這種體外測試方法與體內骨形成的相關性。 W-20 生物測定中測得的反應（堿性磷酸酶誘導）與體內使用測試 (UT) 中 rhBMP-2 的異位骨形成能力相關。通過兩種蛋氨酸的靶向過乙酸氧化而部分或完全失活的 rhBMP-2 被用作比較活性的工具。通過肽圖分析和質譜分析表明，過乙酸對 rhBMP-2 的氧化可特異性靶向蛋氨酸。這些蛋氨酸位于 rhBMP-2 上的疏水性受體結合袋中。將氧化樣品與孵育對照和天然對照進行比較。 62%、87%、98% 和 100% 氧化的樣品的 W-20 活性水平分別為 62%、20%、7% 和 5%。孵育樣品和天然對照樣品保持 100% 活性。在 UT 中對樣品進行了評估，結果顯示失活對骨形成活性具有類似的影響。相對于孵育對照，W-20 測定中活性為 62% 和 20% 的樣品顯示骨形成水平降低，與 W-20 比活性降低的水平相似。在 7% 和 5% 活性 rhBMP-2 植入物中很少或沒有形成異位骨。
1.3 因此，受體結合位點中 rhBMP-2 分子的修飾降低了 W-20 和 UT 測定中的活性。這些數(shù)據(jù)表明，rhBMP-2 上的單個受體結合域負責體外和體內活性，并且 W-20 生物測定是 rhBMP-2.1.4 骨形成活性的相關預測因子。 SI 單位被視為標準。本標準并不旨在解決與其使用相關的所有安全問題（如果有）。本標準的使用者有責任在使用前建立適當?shù)陌踩徒】祵嵺`并確定監(jiān)管限制的適用性。

專題

ASTM F2131-02(2007)相似標準