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Flash純化時，什么時候需要使用ELSD（蒸發(fā)光散射檢測器）？
Flash快速色譜看似簡單，但其實可能很復(fù)雜。溶劑選擇、色譜柱大小、固定相、載樣技術(shù)、梯度方法、流速和檢測參數(shù)都是影響快速色譜和您成功使用該純化技術(shù)的因素。在這些變量中，檢測參數(shù)（即檢測器類型）確確實實會很大程度地影響快速色譜的結(jié)果。
盡管絕大多數(shù)小分子化合物（至少是藥物發(fā)現(xiàn)實驗室制造的化合物）在一個或多個波長上具有紫外線吸收，但隨著更多底物的拓展，越來越多的合成和天然化合物幾乎沒有紫外吸收。當這種情況發(fā)生時，大多數(shù)化學(xué)家會添加不同的檢測器，如蒸發(fā)光散射檢測器（ELSD），以發(fā)現(xiàn)和分離此類樣品。
然而，根據(jù)我的經(jīng)驗，對于許多被認為需要ELSD的化合物，當將DAD二極管陣列UV檢測器（全波段掃描）調(diào)整到目標產(chǎn)物的適當波長范圍時，可以提供足夠高的靈敏度，從而保證樣品的完整檢測；屬于這一類別的化合物類型包括一些脂類和萜烯，以及其他具有低紫外線吸收靈敏度的類似化合物。
脂質(zhì)體在最近幾年一直在新聞中出現(xiàn)，其是基于mRNA的新冠肺炎疫苗使用幾種不同的脂質(zhì)體化合物而制成，并且是一組通常認為需要非紫外線檢測器或ELSD才能有效純化的化合物。事實上，ELSD檢測可以提供預(yù)期的結(jié)果，但DAD全波長紫外線檢測器也可以提供預(yù)期的結(jié)果，該檢測器可以根據(jù)這些化合物的具體波長范圍（198-810 nm）進行調(diào)整。
下面我們通過具體的實例來驗證波長聚焦檢測代替ELSD的合理性，此次我們使用反相快速色譜技術(shù)純化飽和脂肪酸酯-月桂酸甲酯（C12:0）、不飽和脂肪酸酯-油酸甲酯（C18:1）以及膽固醇，以上幾種樣品都是紫外信號比較弱的樣品，是一種用于mRNA疫苗的脂質(zhì)納米顆?；旌衔锏闹|(zhì)。
膽固醇
油酸甲酯
月桂酸甲酯
為了將兩種檢測方式進行對比，我們此次將波長聚焦的檢測技術(shù)與ELSD結(jié)合使用，該技術(shù)使用窄波長范圍進行積分加成檢測，并在實際上提高了以上這些化合物的紫外吸收強度，其信號強度甚至可以直接媲美ELSD，見圖1。
圖1 紫外波長聚焦檢測（198-220 nm）和ELSD通過反相快速色譜純化 脂質(zhì)體混合物。
盡管通過ELSD（綠色線）每種樣品都可以有很好的吸收，但在Selekt紫外聚焦的條件下，月桂酸脂和油酸甲酯的酯基（黑色、紅色和藍色線）都可以被很強的檢測到，并且不產(chǎn)生樣品損失（和ELSD相比）。另外具有雙鍵的化合物，如油酸甲酯和膽固醇，也會吸收紫外線并可檢測，盡管波長很低，如圖2所示。
圖2:每種純化脂質(zhì)的紫外光譜。紫外線吸光度范圍為200 nm至220 nm。
對于此類脂肪類化合物，它們的最佳吸收波長往往在200 nm–220 nm之間，另外這種較窄的紫外吸收范圍確實也會影響溶劑的選擇，往往此時我們需要選擇在該波長范圍內(nèi)沒有紫外吸光度的溶劑（乙腈、甲醇、丙酮、己烷、水）。因此此次我們使用水和甲醇進行上述色譜分析。
那么，什么時候需要ELSD檢測器呢？往往是在純化那些不含紫外吸收官能團（例如酯）的飽和脂類化合物、飽和萜烯和其他不含紫外吸收基團的分子。但凡您的樣品當中一個或者多種脂基羰基這種具有紫外吸收的基團，您都無需額外配置ELSD檢測檢測，通過Biotage紫外聚焦檢測功能即可完成弱紫外吸收樣品的分析和檢測。
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