流式細胞術原理
FSC通道
FSC,即前向角散射,它的值代表細胞的?大小?。所以可以利用細胞的FSC值初步比較細胞的大小,利用FSC值對細胞進行分群和分類。
SSC通道
SSC,即側(cè)向角散射,它的值代表?細胞的顆粒度?(granularity)。細胞越不規(guī)則,細胞表面的突起越多,細胞內(nèi)能夠引起激光散射的細胞器或者顆粒性物質(zhì)越多,其SSC值就越大。所以可以利用細胞的SSC值初步比較細胞的顆粒度,利用SSC值對細胞進行分群和分類。
檢測樣品中是否含有細胞表達某一CD分子——標記熒光素偶聯(lián)的該CD分子的抗體——表達有該CD分子的細胞就會結(jié)合熒光素偶聯(lián)抗的該CD分子的抗體——熒光素被相應的激光激發(fā)后產(chǎn)生熒光——熒光通道值反映接收到的熒光信號的強弱,——反映細胞上結(jié)合的熒光素的量,反映細胞上表達該CD分子的量——間接反映細胞表達某CD分子這一化學特征
不同細胞群的FSC值和SSC值最多相差幾倍,而熒光信號強弱之間一般相差很大,陰性細胞與陽性細胞之間、強陽性與弱陽性之間有時可以相差幾十倍、幾百倍,甚至幾千倍,呈指數(shù)關系。 流式圖數(shù)軸上FSC值和SsC值以“一般數(shù)序形式”表示,而熒光通道值常以“對數(shù)形式”(logarithmic scale)表示
流式直方圖的x軸表示一個通道的值,y軸表示細胞數(shù)量。
流式直方圖只能表示一個通道的信息,而流式散點圖能夠同時表示兩個通道的信息,可以非常直觀地發(fā)現(xiàn)細胞群體中這兩個通道值的相互高低關系,從而更易于細胞分群、分類,以及確定比例關系等。
流式散點圖也是采取坐標軸的方式,x軸表示一個通道的值,y軸表示另一個通道的值,圖中每一點代表一個細胞,該點所對應的橫坐標值就是該點所代表細胞的x軸通道的值,所對應的縱坐標值就是該點所代表細胞的y軸通道的值。
環(huán)線聚集越多的地方表示此區(qū)域細胞密度變化越快,細胞最稀疏的地方還是用散點表示,環(huán)線的中央?yún)^(qū)域代表細胞聚集的中心
流式等高線圖比流式散點圖更能直觀地體現(xiàn)細胞的分群。
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焦點事件
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焦點事件
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綜述