脂肪酶的測定實驗
實驗方法原理
實驗材料 酶樣品
試劑、試劑盒 氯化鈉氯化鈣牛血清蛋白?；悄懰徕c橄欖油-阿拉伯樹膠乳膠脂肪酶NaOH
儀器、耗材 自動滴定器
實驗步驟
實驗混合物：
5 ml 橄欖油-阿拉伯樹膠乳膠
5 ml H2O
2 m l 3.0 mol/L NaCl
1 ml 0.075 mol/L 氯化鈣
2 ml 0.5％BSA（酵母脂肪酶）或 0.027 mol/L ?；悄懰徕c（豬脂肪酶）
15 ml，調(diào)至 pH 8.0
空白對照：記錄約 3 min 內(nèi)，每次自動滴定器加入的滴定標(biāo)準(zhǔn)液的量。
樣品：在實驗混合物中加入合適量的稀釋酶（根據(jù)活性），并記錄約 5 min 內(nèi)，每次自動滴定器加入的滴定標(biāo)準(zhǔn)液的量。
計算：
25℃、pH 8.0 時，從乳化的橄欖油中，每分鐘一個單位釋放出 1 umol 脂肪酸。
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注意事項
其他
試劑：
3.0 mol/L 氯化鈉（NaCl，Mr＝58.4；17.5 g 溶于 100 ml 水中）
0.075 mol/L 氯化鈣（CaCl2·6H2O；Mr＝219.1；1.62 g 溶于 100 ml 水中）
0.005 mol/L 氯化鈣（稀釋 0.075 mol/L 氯化鈣溶液 15 倍）。
0.5％ 牛血清蛋白（BSA，酵母脂肪酶）
0.027 mol/L 牛磺膽酸鈉（豬脂肪酶，Mr＝537.7；1.45 g 溶于 100 ml 水中）
橄欖油-阿拉伯樹膠乳膠。溶解 16.5 g 阿拉伯樹膠于 130 ml 水中，補(bǔ)充至 165 ml。加入 20 ml 橄欖油和 15 g 碎冰，低速攪拌直到乳濁液形成。用玻璃絨過濾。
脂肪酶（儲存溶液：每毫升 5 mmol/L 氯化鈣溶解 1 mg，實驗中再稀釋于 5 mmol/L 氯化鈣中）
0.01 mol/L NaOH 標(biāo)準(zhǔn)溶液作為滴定劑，加入自動滴定器的滴管中。
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