引物Tm值與PCR產(chǎn)物Tm值有什么區(qū)別
引物TM是設(shè)值和合成引物時(shí)的Tm值,
也就是理論值。
而PCR產(chǎn)物tm值是在實(shí)際操作中摸索出來的溫度值
引物Tm值與PCR產(chǎn)物Tm值這兩個(gè)不同的引物當(dāng)然退火溫度也不相同,一般在設(shè)計(jì)引物的時(shí)候,程序就會顯示出Tm值是多少.在做PCR的時(shí)候,將退火溫度設(shè)定的稍微低于Tm值一點(diǎn),降低引物的特異性,可能會好點(diǎn).
當(dāng)然,做PCR有一定的運(yùn)氣成分,同樣的條件有時(shí)能擴(kuò)出基因來,有時(shí)候卻不能.一般來說,一直無法P出基因的話,首先就要檢查引物設(shè)計(jì)是否有問題,如果沒有問題,或者以前P出來過.那么檢查下退火溫度,多試幾個(gè)溫度.再就是Mg離子的濃度,模板不要太多.多嘗試一下.
總之,設(shè)定退火溫度的時(shí)候略微比Tm低一點(diǎn),適當(dāng)?shù)恼{(diào)整,多多嘗試,就好了.
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