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細胞劃痕實驗——劃痕法

2019.4.01

細胞劃痕實驗可應用于:(1)檢測貼壁生長腫瘤細胞的侵襲轉移能力;(2)研究細胞基質和細胞間相互作用對細胞遷移的影響。



實驗方法原理創(chuàng)傷愈合實驗是一種簡單、廉價的方法,也是最早發(fā)展起來的研究定向細胞在體外遷移的方法之一。該方法模擬了細胞在體內愈合過程中的遷移過程。基本步驟包括在細胞單層中創(chuàng)建一個“傷口”,在細胞遷移過程中在開始和定期捕獲圖像以關閉傷口,以及比較圖像以確定細胞遷移速率。
實驗材料

細胞樣品

試劑、試劑盒

無血清培養(yǎng)基PBS

儀器、耗材

6孔板marker筆直尺槍頭

實驗步驟

一.準備:
所有能滅菌的器械都要滅菌,直尺和marker筆在操作前紫外照射30min(超凈臺內)

二.流程:
1.先用marker筆在6孔板背后,用直尺比著,均勻得劃橫線,大約每隔0.5~1cm一道,橫穿過孔。每孔至少穿過5條線。
2.在空中加入約5X105個細胞,具體數(shù)量因細胞不同而不同,掌握為過夜能鋪滿。
3.第二天用槍頭比著直尺,盡量垂至于背后的橫線劃痕,槍頭要垂直,不能傾斜。
4.用PBS洗細胞3次,去處劃下的細胞,加入無血清培養(yǎng)基。
5.放入37度5%CO2培養(yǎng)箱,培養(yǎng)。按0,6,12,24小時取樣,拍照。

下面是照片,細胞NIH3T3
0h

1554117043532667.jpg

6h

1554117043973963.jpg

12h

1554117044616189.jpg

24h

1554117044527165.jpg

展開?
注意事項

1.劃痕法測量適用的細胞范圍較小,一般只適用于上皮細胞,纖維樣細胞。


2.雖然無血清培養(yǎng)可以忽略細胞增殖的影響,但是由于細胞內信號傳導系統(tǒng)整體性的下調節(jié),細胞遷移的速度也會慢很多。


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