免疫磁珠分離法的原理和操作辦法
一、免疫磁珠分離法（immunomagnetic separation，IMS）
1、原理
用包被在磁珠上的抗 E.coli O157：H7 特異性抗體捕獲樣品增菌液中的目標菌，然后在磁場作用下將磁珠從增菌液中沉淀，以磷酸緩沖液反復清洗，從而使 E.coli O157：H7 ，與樣品中的其他成分及細菌分離，并將分離出的 E.coli O157：H7 菌體定量于一定體積，在具體應(yīng)用中，還可加入適量的堿性魚精蛋白（0.005mg/mL）以降低非靶菌體在玻璃試管壁的殘留。
2、儀器設(shè)備及試劑
包被有抗 E.coli O157：H7 特異性抗體的免疫磁珠，免疫磁珠分離架，培養(yǎng)箱，均質(zhì)器，mEC肉湯，山梨醇麥康凱培養(yǎng)基等。
3、操作方法
?、僭鼍囵B(yǎng)
在225mL mEC肉湯內(nèi)加入25g 樣品，36℃±1℃培養(yǎng)18～24h。
?、诖胖榉蛛x
將一定量的磁珠（根據(jù)產(chǎn)品的說明決定）加入增菌肉湯中，充分攪拌混勻，讓目標菌充分結(jié)合在磁珠上。將培養(yǎng)瓶放在分離架上，使磁珠吸附在培養(yǎng)瓶中靠分離架磁板的一面，倒掉培養(yǎng)液，將磁珠洗下。
③培養(yǎng)
將洗下的磁珠倒入山梨醇麥康凱平板中，讓磁珠在培養(yǎng)基的表面滾動，使磁珠上吸附的 E.coli O157：H7 ，釋放在培養(yǎng)基表面。再將平板放入培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)24h，取出觀察菌落特征再進一步確認。
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