RNA酶保護實驗(RNase Protection Assay,RPA)簡介
簡介:
RNA酶保護試驗(RNase Protection Assay,RPA)是通過液相雜交的方式,用反義RNA探針與樣品雜交,以檢測RNA表達的技術。
1. ?原理:雙鏈RNA(雜交的)能夠抵抗RNA酶的降解。
2. ?應用:檢測RNA表達
3. ?與Northern雜交和RT-PCR比較,RPA有以下幾個優(yōu)點:
(1) 檢測靈敏度比Northern雜交高。由于Northern雜交步驟中轉(zhuǎn)膜和洗膜都將造成樣品和探針的損失,使靈敏度下降,而RPA將所有雜交體系進行電泳,故損失小,提高了靈敏度。
(2)由于PCR擴增過程中效率不均一和反應“平臺”問題,基于PCR產(chǎn)物量進行分析所得數(shù)據(jù)的可靠性將下降,而RPA沒有擴增過程,因此,分析的數(shù)據(jù)真實性較高。
(3)由于與反義RNA探針雜交的樣品RNA僅為該RNA分子的部分片段,因此,部分降解的RNA樣品仍可進行分析。
(4)步驟較少,耗時短。與Northern雜交相比,省去了轉(zhuǎn)膜和洗膜的過程。
(5)RNA-RNA雜交體穩(wěn)定性高,無探針自身復性問題,無須封閉。
(6)一個雜交體系中可同時進行多個探針雜交,無競爭性問題。
(7)檢測分子長度可以任意設置,靈活性大。
4. ?RPA的缺點是需要同位素標記探針。
推薦