分子熒光法測定蒽
分子熒光法測定蒽
一、?實驗?zāi)康?/span>
1.?掌握熒光光度分析法的基本原理和方法以及熒光激發(fā)光譜和發(fā)射光譜的關(guān)系；
2.?掌握熒光光譜儀的基本組成及使用方法；
3.?掌握熒光光譜定量分析的基本方法。
二、?實驗原理
處于基態(tài)的熒光物質(zhì)分子吸收與其對應(yīng)的特征電子能級相一致的光能后，將躍遷到能量較高的電子激發(fā)態(tài)。處于較高電子激發(fā)態(tài)的分子，經(jīng)振動弛豫、內(nèi)轉(zhuǎn)換等非輻射方式躍遷到單重激發(fā)態(tài)的最低振動能級，然后在10-9~10-7s的短時間內(nèi)發(fā)射光子返回基態(tài)，產(chǎn)生分子的熒光發(fā)射光譜。
每種熒光物質(zhì)都具有特征的熒光激發(fā)光譜和熒光發(fā)射光譜，通常熒光發(fā)射光譜和它的激發(fā)光譜呈鏡像對稱關(guān)系。
三、?儀器與試劑
儀器：熒光分光光度計（光譜儀）。容量瓶若干。試劑：10 mg·L-1蒽標(biāo)準(zhǔn)儲備液。
四、?實驗步驟
1.?測量溶液的配制
準(zhǔn)確移取10 mg·L-1蒽標(biāo)準(zhǔn)儲備液0.5、1、1.5、2和2.5mL于5個50mL容量瓶中，分別加入無水乙醇稀釋至刻度，所得溶液濃度分別為0.1、0.2、0.3、0.4和0.5 mg·L-1。
2.?激發(fā)光譜和發(fā)射光譜的繪制
開啟儀器，預(yù)熱10分鐘，預(yù)掃描確定最佳激發(fā)波長和發(fā)射波長，在最佳發(fā)射波長下繪制激發(fā)光譜；在最佳激發(fā)波長下繪制發(fā)射光譜。改變不同的激發(fā)光波長，觀察激發(fā)光波長對熒光發(fā)射光譜的影響。
3.?不同濃度下熒光光譜的繪制
分別對濃度為1.00、2.00、3.00、4.00和5.00 mg·L-1的蒽的無水乙醇溶液掃描熒光光譜，并進(jìn)行比較，觀察濃度對熒光光譜的影響。
4.?蒽樣品的定量分析
（1）標(biāo)準(zhǔn)系列溶液熒光強(qiáng)度的測定
分別由稀到濃測定濃度為0.1、0.2、0.3、0.4和0.5 mg·L-1的蒽的無水乙醇溶液的熒光強(qiáng)度。
（2）未知樣品的測定
取待測樣品，用與測定標(biāo)準(zhǔn)溶液時相同的條件，測定其熒光強(qiáng)度。
五、?數(shù)據(jù)及處理
1．用標(biāo)準(zhǔn)系列溶液的熒光強(qiáng)度，以溶液濃度為橫坐標(biāo)、熒光強(qiáng)度為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。
2．根據(jù)待測試樣的熒光強(qiáng)度，從標(biāo)準(zhǔn)曲線上求得其濃度。
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綜述
