核酸檢測(cè)試劑原材料有哪些呢，趕緊來看看吧
核酸檢測(cè)試劑原材料有哪些呢，趕緊來看看吧
核酸檢測(cè)試劑是基于核酸擴(kuò)增檢測(cè)技術(shù)的體外診斷試劑，包括等溫?cái)U(kuò)增、PCR，qPCR等?，F(xiàn)在有些實(shí)驗(yàn)室自己合成引物探針，生產(chǎn)qPCR診斷試劑，也有些試劑生產(chǎn)企業(yè)在問如何保證試劑生產(chǎn)過程的質(zhì)量控制。
檢測(cè)試劑的生產(chǎn)質(zhì)控與診斷試劑的評(píng)價(jià)既有相同點(diǎn)，因?yàn)槎际腔谙嗤脑u(píng)價(jià)指標(biāo)；又有不同點(diǎn)，生產(chǎn)過程會(huì)關(guān)注原料、半成品、成品，診斷試劑評(píng)價(jià)只針對(duì)成品。
核酸檢測(cè)試劑原材料有如下這些：
1、dNTP
脫氧三磷酸核苷，核酸的組成成分，包括：dATP、dUTP、dGTP、dCTP和dTTP。應(yīng)為HPLC純、PCR級(jí)，無(wú)DNase和RNase污染。-20℃保存。
2、引物
由一定數(shù)量的核苷酸構(gòu)成的特定序列，通常采用DNA合成儀人工合成，合成后經(jīng)聚丙烯酰胺凝膠電泳或其他適宜方法純化。凍干粉，1800D以上。序列正確。純度應(yīng)達(dá)到電泳級(jí)（PAGE）或HPLC級(jí)，不含雜帶。應(yīng)提供合成機(jī)構(gòu)出具的合成產(chǎn)物的質(zhì)檢證明，如PAGE電泳結(jié)果或HPLC分析圖譜。應(yīng)作HPLC分析和紫外光吸收分析。以紫外分光光度計(jì)測(cè)定OD260nm/OD280nm的比值在1、6~2、0之間，可視為合格引物。-20℃保存。
3、探針
是指特定的帶有示蹤物（標(biāo)記物）的已知核酸片段（寡聚核苷酸片段），能與互補(bǔ)核酸序列退火雜交，用于特定核酸序列的探測(cè)。通常采用DNA合成儀人工合成，合成后經(jīng)聚丙烯酰胺凝膠電泳或其他適宜方法純化，在5-端標(biāo)記熒光素報(bào)告基團(tuán)或其他發(fā)光標(biāo)記物，在3-端標(biāo)記熒光素淬滅基團(tuán)，并經(jīng)HPLC或其他適宜方法純化。
4、Taq DNA聚合酶
具有DNA聚合酶活性，無(wú)核酸外切酶活性及核酸內(nèi)切酶活性；具熱穩(wěn)定性，94℃保溫1小時(shí)后仍保持50%活性。-20℃保存。
5、UNG（尿嘧啶糖基化酶）
具有尿嘧啶糖基化酶活性，無(wú)核酸外切酶及核酸內(nèi)切酶活性，IU UNG在 37℃處理3分鐘后，103拷貝以下含U模版應(yīng)完全降解，不能產(chǎn)生擴(kuò)增產(chǎn)物。-20℃保存。
6、RT-PCR酶（反轉(zhuǎn)錄擴(kuò)增酶）
具逆轉(zhuǎn)錄酶活性和DNA聚合酶活性，無(wú)核酸外切酶及核酸內(nèi)切酶活性；具熱穩(wěn)定性，94℃1小時(shí)后仍保持50%活性，-20℃保存。
好了，以上便是關(guān)于核酸檢測(cè)試劑的相關(guān)內(nèi)容介紹了。
