核酸擴(kuò)增—實(shí)時(shí)熒光PCR
實(shí)時(shí)熒光PCR，即在常規(guī)PCR擴(kuò)增時(shí)加入一對(duì)引物的同時(shí)加入一個(gè)特異性的熒光探針，該探針為一寡核苷酸，兩端分別標(biāo)記一個(gè)報(bào)告熒光基團(tuán)和一個(gè)淬滅熒光基團(tuán)。探針完整時(shí)，報(bào)告基團(tuán)發(fā)射的熒光信號(hào)被淬滅基團(tuán)吸收；剛開(kāi)始時(shí)，探針結(jié)合在DNA任意一條單鏈上；PCR擴(kuò)增時(shí)，Taq酶的5'-3'端外切酶活性將探針酶切降解，使報(bào)告熒光基團(tuán)和淬滅熒光基團(tuán)分離，從而熒光監(jiān)測(cè)系統(tǒng)可接收到熒光信號(hào)，即每擴(kuò)增一條DNA鏈，就有一個(gè)熒光分子形成，實(shí)現(xiàn)了熒光信號(hào)的累積與PCR產(chǎn)物形成完全同步。實(shí)時(shí)熒光PCR是目前使用最多的核酸檢測(cè)方法。 實(shí)時(shí)熒光PCR技術(shù)采用完全閉管熒光檢測(cè)，無(wú)需電泳，有效地解決了常規(guī)PCR的污染問(wèn)題，還可以定量檢測(cè)標(biāo)本中的病原體，并且操作更簡(jiǎn)便、快速，有很高的臨床實(shí)用價(jià)值。但試劑和儀器設(shè)備都比較昂貴，臨床上應(yīng)根據(jù)患者需要加以選擇應(yīng)用。
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