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酶標(biāo)儀--酶標(biāo)儀的檢測(cè)單位和檢測(cè)值計(jì)算

2021.11.15

光通過(guò)被檢測(cè)物,前后的能量差異即是被檢測(cè)物吸收掉的能量,特定波長(zhǎng)下,同一種被檢測(cè)物的濃度與被吸收的能量成定量關(guān)系。

檢測(cè)單位用OD值表示, OD是optical density(光密度)的縮寫,表示被檢測(cè)物吸收掉的光密度, OD=log(1/trans),其中trans為檢測(cè)物的透光值。根據(jù)Bouger-amberT-beer法則,OD值與光強(qiáng)度成下述關(guān)系:

E=OD=log(lo/Ι) 其中E表示被吸收的光密度, Ιo 為在檢測(cè)物之前的光強(qiáng)度,Ι為從被檢測(cè)物出來(lái)的光強(qiáng)度。

OD值由下述公式計(jì)算:

c為檢測(cè)物的濃度 b為檢測(cè)物的厚度 a為摩爾因子

在特定波長(zhǎng)下測(cè)定每一種物質(zhì)都有其特定的波長(zhǎng),在此波長(zhǎng)下,此物質(zhì)能夠吸收最多的光能量。如果選擇其它的波長(zhǎng)段,就會(huì)造成檢測(cè)結(jié)果的不準(zhǔn)確。因此,在測(cè)定檢測(cè)物時(shí),我們選擇特定的波長(zhǎng)進(jìn)行檢測(cè),稱為測(cè)量波長(zhǎng)。

但是每一種物質(zhì)對(duì)光能量還存在一定的非特異性吸收,為了消除這種非特異性吸收,我們?cè)龠x取一個(gè)參照波長(zhǎng),以消除這個(gè)不準(zhǔn)確性。在參照波長(zhǎng)下,檢測(cè)物光的吸收最小。檢測(cè)波長(zhǎng)和參照波長(zhǎng)的吸光值之差可以消除非特異性吸收。

儀器中的檢測(cè)器接收透過(guò)被檢測(cè)物的光能量,轉(zhuǎn)換成二進(jìn)位數(shù)字信號(hào),最大為4095。儀器定義沒(méi)有光源下的透光值為 0%,沒(méi)有檢測(cè)物的透光值為100%。則實(shí)際檢測(cè)中,檢測(cè)物的透光值均在 0%一100%之間。透光值的計(jì)算如下:

T=(Meas—Min)/(Max—Min)

其中T為透光值, Meas為檢測(cè)的二進(jìn)位數(shù)值, Min為在 0%的情況下檢測(cè)的二進(jìn)位數(shù)值, Max為在100%的情況下檢測(cè)的二進(jìn)位數(shù)值,舉例如下:

MaX=3600

Min=20

Meas=30

T=(30-20)/3600-20)=0.0028

OD=log(1/T)=log(1/0.0028)=2.552


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