定性檢測(cè)試劑交叉反應(yīng)研究探討
在《IVD注冊(cè)資料大解密丨定性檢測(cè)試劑干擾評(píng)估實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)探討》中我們探討了干擾評(píng)估實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)，此類實(shí)驗(yàn)屬于分析特異性性能評(píng)估實(shí)驗(yàn)范疇；分析特異性實(shí)驗(yàn)一般包括干擾和交叉反應(yīng)研究。小編在此篇中和大家探討一下交叉反應(yīng)的定義以及其研究方法。
01
什么是交叉反應(yīng)
交叉反應(yīng)，在一般意義上，是一個(gè)被觀察的試劑的反應(yīng)，它引起的反應(yīng)超出預(yù)期的主要反應(yīng)。這對(duì)任何類型的檢測(cè)或化驗(yàn)都有影響，包括醫(yī)學(xué)診斷測(cè)試，可能是假陽性的一個(gè)原因。例如檢測(cè)核酸物質(zhì)的試劑當(dāng)遇到來自同源區(qū)域、偽基因或其他類型的交叉反應(yīng)序列時(shí)可能導(dǎo)致錯(cuò)誤的分析物檢測(cè)，產(chǎn)生假陽性結(jié)果。此外患者標(biāo)本的交叉污染將錯(cuò)誤的序列引入檢測(cè)，從而可能導(dǎo)致假陽性和假陰性結(jié)果。
02
常見交叉反應(yīng)物質(zhì)
一般包括分析物的結(jié)構(gòu)類似物、具有同源性序列的核酸片段、檢測(cè)范圍外的型別；
易引起相同或相似的臨床癥狀的其他病原體、相同或相似的臨床癥狀出現(xiàn)時(shí)，體內(nèi)易升高的其他蛋白；
采樣部位正常寄生或易并發(fā)的其他微生物，包含近緣微生物。
另外由于產(chǎn)品原材料設(shè)計(jì)可能引入的交叉反應(yīng)。如病原體抗體檢測(cè)試劑采用基因重組抗原，應(yīng)增加對(duì)異源物質(zhì)如重組基因及表達(dá)宿主的特異性抗體的交叉反應(yīng)評(píng)價(jià)；如采用小鼠源性單克隆抗體作為主要原材料，應(yīng)注意HAMA可能對(duì)檢測(cè)造成的影響。
03
研究方法
建議選擇高濃度交叉反應(yīng)物水平進(jìn)行驗(yàn)證，細(xì)菌或者真菌的最低濃度為10??CFU/mL；病毒的最低濃度為10??PFU/mL；人野生型DNA至少包含1000 ng/μL野生核酸樣本。
對(duì)于核酸檢測(cè)試劑
當(dāng)遇交叉反應(yīng)物難以獲得，如病原體難以培養(yǎng)或基因型頻率低時(shí)，可采用核酸樣本進(jìn)行交叉反應(yīng)的驗(yàn)證。此時(shí)應(yīng)將核酸樣本視為實(shí)際使用過程中參與檢測(cè)反應(yīng)的核酸樣本，根據(jù)說明書的要求配制反應(yīng)體系，進(jìn)行檢測(cè)。
對(duì)于血清學(xué)檢測(cè)試劑
用于交叉反應(yīng)研究的抗體類型應(yīng)與待測(cè)目的的抗體類型相同，如檢測(cè)病原病原體特異性IgG抗體，應(yīng)研究與其他相關(guān)病原體特異性IgG抗體的交叉反應(yīng)
04
示例
檢測(cè)人EGFR基因突變的試劑（cobas?EGFR）的交叉反應(yīng)實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)
cobas?EGFR檢測(cè)的特異性通過檢測(cè)肺部相關(guān)微生物和包含EGFR同源物的人工合成的質(zhì)粒，其中EGFR同源物為與cobas?EGFR檢測(cè)范圍內(nèi)的 EGFR外顯子18、19、20和21中的序列相似物，來自HER2、HER3和HER4基因區(qū)域的序列。
4.1?EGFR同源性序列
在提取的DNA中加入基因拷貝數(shù)相當(dāng)于50ng/PCR的EGFR同源質(zhì)粒DNA，檢測(cè)結(jié)果顯示上述同源序列(EGFR/HER1, HER2, HER3 and HER4)不與試劑盒發(fā)生交叉反應(yīng)。對(duì)照組不包括質(zhì)粒DNA。結(jié)果表明，在有無加入HER基因質(zhì)粒DNA的情況下，所有20個(gè)測(cè)試的FFPET樣本觀察到的突變均與通過測(cè)序確定的預(yù)期突變相符。此外，對(duì)EGFR 19外顯子突變L747S進(jìn)行交叉反應(yīng)性檢測(cè)。結(jié)果表明，cobas?EGFR測(cè)試與EGFR 19外顯子突變L747S交叉反應(yīng)。
4.2肺部相關(guān)微生物
在組織裂解過程中，當(dāng)將肺炎鏈球菌和流感嗜血桿菌加入含有野生型和突變型EGFR序列的樣本時(shí)，發(fā)現(xiàn)它們?cè)?×105菌落形成單位時(shí)沒有交叉反應(yīng)或干擾cobas?EGFR測(cè)試。
05
總結(jié)
如上述交叉反應(yīng)的定義，是一個(gè)被觀察的試劑的反應(yīng)，它引起的反應(yīng)超出預(yù)期的主要反應(yīng)。一個(gè)試劑盒的分析特異性不能以是否有交叉反應(yīng)而評(píng)價(jià)，而是要看超出預(yù)期的反應(yīng)的類型。
如果是與非靶標(biāo)分析物反應(yīng)出檢測(cè)范圍內(nèi)的分析物，則說明試劑盒有非特異性存在，即產(chǎn)生了假陽性結(jié)果；
但如果反應(yīng)出檢測(cè)范圍外的分析物同時(shí)也未影響試劑盒的檢出率和分析特異性那這個(gè)交叉反應(yīng)個(gè)人覺得是允許的。
