PCR擴(kuò)出來的條帶亮度很弱是什么原因
1. 模板的用量在你這種情況下應(yīng)該和目的條帶濃度關(guān)系不大——記得realtimePCR的原理圖么，循環(huán)數(shù)夠多時(shí)，目的片段的終濃度在不同模板量條件下相差不大；
2.首先考慮擴(kuò)增效率問題，可用touch down PCR，除開頭幾個(gè)循環(huán)外，后面的退火溫度降低一些，可提高擴(kuò)增效率；
3.如果無效，建議使用兩步法，95度 1min，（60-65）度 3min，可加入touch down 步驟；
4.不知道反應(yīng)體系如何配置，應(yīng)該是使用了GCbuffer吧？TaKaRa的GCbuffer（尤其是II）的確會(huì)降低一些擴(kuò)增效率；
5.視你最終需要，如果是診斷目的，可多加一些Taq酶，也能增加擴(kuò)增效率，但錯(cuò)配率和非特異擴(kuò)增可能會(huì)增加。如果是克隆目的，其實(shí)目的條帶暗一些很多時(shí)候并不影響最終實(shí)驗(yàn)結(jié)果。
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