退火溫度低會對PCR產(chǎn)生什么影響
通常來說,退火溫度是由引物的GC%含量決定的,但是反應(yīng)體系的條件改變也會影響引物的退火溫度(如Mg,Na等離子濃度)。建議你去http://www.idtdna.com/analyzer/Applications/OligoAnalyzer/分析一下你的PCR體系中的引物退火溫度,而不是僅僅由公式計(jì)算得出。一般情況下,退火溫度過低只會導(dǎo)致反應(yīng)體系中引物與DNA模板的非特異性結(jié)合,致使反應(yīng)結(jié)果中出現(xiàn)大量非特異性結(jié)合條帶。但是,你所需的產(chǎn)物也應(yīng)該是包含在其中的,如果完全沒有結(jié)果,說明你反應(yīng)體系中其他步驟還存在問題,例如擴(kuò)增時間等比較關(guān)鍵的步驟。
另:不同的hot taq酶對Tm要求也是不同的。例如今年clontech新出了一種十分nb的hot taq酶,它需要的Tm溫度是引物Tm溫度再高5度。所以,弄清楚你試劑盒的反應(yīng)條件要求也是很有必要的...
推薦
熱點(diǎn)排行
一周推薦