RNA酶保護(hù)試驗(yàn)((RNase Protection Assay,RPA)簡(jiǎn)介
RNA酶保護(hù)試驗(yàn)((RNase Protection Assay,RPA)是通過(guò)液相雜交的方式,用反義RNA探針與樣品雜交，以檢測(cè)RNA表達(dá)的技術(shù)。
1。原理：雙鏈RNA（雜交的）能夠抵抗RNA酶的降解。
2。應(yīng)用：檢測(cè)RNA表達(dá)
3。與Northern雜交和RT-PCR比較，RPA有以下幾個(gè)優(yōu)點(diǎn)：
1． 檢測(cè)靈敏度比Northern雜交高。由于Northern雜交步驟中轉(zhuǎn)膜和洗膜都將造成樣品和探針的損失，使靈敏度下降，而RPA將所有雜交體系進(jìn)行電泳，故損失小，提高了靈敏度。
2． 由于PCR擴(kuò)增過(guò)程中效率不均一和反應(yīng)“平臺(tái)”問(wèn)題，基于PCR產(chǎn)物量進(jìn)行分析所得數(shù)據(jù)的可靠性將下降，而RPA沒(méi)有擴(kuò)增過(guò)程，因此，分析的數(shù)據(jù)真實(shí)性較高。
3． 由于與反義RNA探針雜交的樣品RNA僅為該RNA分子的部分片段，因此，部分降解的RNA樣品仍可進(jìn)行分析。
4． 步驟較少，耗時(shí)短。與Northern雜交相比，省去了轉(zhuǎn)膜和洗膜的過(guò)程。
5． RNA-RNA雜交體穩(wěn)定性高，無(wú)探針自身復(fù)性問(wèn)題，無(wú)須封閉。
6． 一個(gè)雜交體系中可同時(shí)進(jìn)行多個(gè)探針雜交，無(wú)競(jìng)爭(zhēng)性問(wèn)題。
7． 檢測(cè)分子長(zhǎng)度可以任意設(shè)置，靈活性大。
RPA的缺點(diǎn)是需要同位素標(biāo)記探針。
