電泳法分離蛋白質(zhì)原理是什么
電泳法,是指帶電荷的供試品(蛋白質(zhì)、核苷酸等)在惰性支持介質(zhì)(如紙、醋酸纖維素、瓊脂糖凝膠、聚丙烯酰胺凝膠等)中,于電場的作用下,向其對應的電極方向按各自的速度進行泳動,使組分分離成狹窄的區(qū)帶,用適宜的檢測方法記錄其電泳區(qū)帶圖譜或計算其含量(%)的方法。電泳法包括紙電泳法、醋酸纖維素薄膜電泳法、聚丙烯酰胺凝膠電泳法、SDS-聚丙烯酰胺凝膠電泳法等。
電泳不但應用于蛋白質(zhì)的分離與含量的測定,而且在免疫學實驗中有許多新的應用。例如:診斷乙型肝炎的乙型肝炎抗原(HBAg)的電泳測定>診斷原發(fā)性肝癌的甲胎蛋白(AFP>的電泳測定等等。
一般臨床檢驗室對電泳的應用,主要還是蛋白質(zhì)的檢定。以下就談談蛋甶質(zhì)電泳的原理。蛋白質(zhì)是由氨基酸組成的,所以血淸中各種蛋白質(zhì)都和氨基酸一樣具有酸性基團(-COOH),或鹼性基團(-NH2)。
若溶液的PH值低于等電點,則這個蛋白質(zhì)帶生電荷,在電場中向負極移動。反之,溶液的PH值大于等電點,則這個蛋白質(zhì)帶負電荷,在電場中向正極移動。蛋白質(zhì)兩性離各種蛋白質(zhì)都有它的等電點。人血漿蛋白質(zhì)的等電點如表46。其等電點都低于PH7.5,所以在pH比它們等電點高的緩沖液中(PH8.6時),蛋白質(zhì)帶負電荷,在電場中向正極移動。
一蛋白質(zhì)在電場中移動的速度,是和它本身所帶的電量、電場的強度和運動中所受到的阻力有關。因此,在同一條件下各種蛋白質(zhì)的移動速度不同。例如人血淸中各種蛋白質(zhì)等電點不同,在同一PH溶液中移動速度不同,故電泳時能在電泳支持物(如濾紙或瓊脂等)上區(qū)分出各個蛋白質(zhì)。經(jīng)染色后,得到鮮明的色帶圖譜。將各條色帶剪下分別溶于脫色劑中,再進行比色測定,就能求出各種蛋白質(zhì)占總蛋白量的百分率。
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焦點事件
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