蛋白表達(dá)不出來怎么辦
第一步:確定載體序列是否正確，啟示子、終止子、讀碼框等;
第二步:確定操作步驟是否正確，如載體是否被污染，是否成功轉(zhuǎn)化入rossetta，抗生素是否正確等;
第三步:核對(duì)目的基因序列，與大腸桿菌常用密碼子作對(duì)比，優(yōu)化密碼子;
第四步:以上三步?jīng)]有問題時(shí)，若還不表達(dá)，更換載體;
第四步:更換載體還不表達(dá)，選擇GST、MBP、SUMO、GB1等助溶標(biāo)簽融合表達(dá)。
另外，當(dāng)目的蛋白太小或太大時(shí)可能都不易表達(dá):小肽易被降解;太長(zhǎng)例如大的膜蛋白等表達(dá)量往往也很難優(yōu)化。
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