氯化三苯基四氮唑（TTC）法測(cè)定根系活力
【原理】
氯化三苯基四氮唑（TTC）是標(biāo)準(zhǔn)氧化還原電位為80mV的氧化還原物質(zhì)，溶于水中成為無(wú)色溶液，但還原后即生成紅色而不溶于水的三苯基甲 ?（TTF），如下式：
生成的TTF比較穩(wěn)定，不會(huì)被空氣中的氧自動(dòng)氧化，所以TTC被廣泛地用作酶試驗(yàn)的氫受體，植物根所引起的TTC還原，可因加入琥珀酸、延胡索酸、蘋(píng)果酸得到增強(qiáng)，而被丙二酸、碘乙酸所抑制。所以TTC還原量能表示脫氫酶活性，并作為根系活力的指標(biāo)。
【儀器與用具】
分光光度計(jì)；分析天平（感量0.1mg）；恒溫箱1臺(tái)；研缽1套；100ml三角瓶；漏斗；移液管10ml 1支、2ml 1支、0.5ml 1支；20ml刻度試管；10ml容量瓶；小培養(yǎng)皿；試管架，藥匙；石英砂適量。
【試劑】
乙酸乙酯；
連二亞硫酸鈉（Na 2 S 2 O 4 ，為強(qiáng)還原劑，俗稱(chēng)保險(xiǎn)粉）；
1%TTC溶液：準(zhǔn)確稱(chēng)取TTC 1.0g，溶于少量蒸餾水中，定容至100ml；
0.4%TTC溶液：準(zhǔn)確稱(chēng)取TTC 0.4g，溶于少量蒸餾水中，定容至100ml；
磷酸緩沖液（1/15mol/L，pH7.0）；
1mol/L硫酸：用量筒量取比重1.84的濃硫酸55ml，邊攪拌邊加入盛有500ml蒸餾水的燒杯中，冷卻后稀釋至1000ml；
0.4mol/L琥珀酸鈉：稱(chēng)取琥珀酸鈉（含6個(gè)結(jié)晶水）10.81g，溶于蒸餾水中，定容至100ml。
【方法】
1. 定性測(cè)定
（1）配置反應(yīng)液 ?把1%TTC溶液，0.4moL/L琥珀酸鈉和磷酸緩沖液按1:5:4比例混合。
（2）把根仔細(xì)洗凈，把地上部分從莖基切除，將根放入三角瓶中，倒入反應(yīng)液，以浸沒(méi)根為度，置37℃左右暗處放1h，以觀察著色情況，新根尖端幾毫米以及細(xì)側(cè)根都明顯地變成紅色，表明該處有脫氫酶存在。
2. 定量測(cè)定
（1）TTC標(biāo)準(zhǔn)曲線的制作
吸取0.25ml 0.4%TTC溶液放入10ml容量瓶，加少許Na2S2O4粉末，搖勻后立即產(chǎn)生紅色的TTF。再用乙酸乙酯定容至刻度，搖勻。然后分別取此液0.25ml、0.5ml、1.00ml、1.50ml、2.00ml置10ml容量瓶中，用乙酸乙酯定容至刻度，即得到含TTF25μg、50μg、100μg、150μg、200μg的標(biāo)準(zhǔn)比色系列，以空白作參比，在485nm波長(zhǎng)下測(cè)定光密度，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。
（2）稱(chēng)取根樣品0.5g，放入小培養(yǎng)皿（空白試驗(yàn)先加硫酸再加入根樣品，其他操作相同），加入0.4%TTC溶液和磷酸緩沖液的等量混合液10ml，把根充分浸沒(méi)在溶液內(nèi)，在37℃下暗處保溫1h，此后加入1mol/L硫酸2ml，以停止反應(yīng)。
（3）把根取出，吸干水分后與乙酸乙酯3~4ml和少量石英砂一起磨碎，以提出TTF。把紅色提出液移入試管，用少量乙酸乙酯把殘?jiān)礈於寥?，皆移入試管，最后加乙酸乙酯使總量?0ml，用分光光度計(jì)在485nm下比色，以空白作參比讀出光密度，查標(biāo)準(zhǔn)曲線，求出四氮唑還原量。
（4）計(jì)算
將所得數(shù)據(jù)帶入下式，求出四氮唑還強(qiáng)度。
