關(guān)于等電點(diǎn)沉淀法的注意事項(xiàng)介紹
1．不同的蛋白質(zhì)，具有不同的等電點(diǎn)。在生產(chǎn)過程中應(yīng)根據(jù)分離要求，除去目的產(chǎn)物之外的雜蛋白；若目的產(chǎn)物也是蛋白質(zhì)，且等電點(diǎn)較高時(shí)，可先除去低于等電點(diǎn)的雜蛋白，如細(xì)胞色素C [1]的等電點(diǎn)為10.7，在細(xì)胞色素C的提取純化過程中，調(diào)pH=6.0除去酸性蛋白，調(diào)pH=7.5～8.0，除去堿性蛋白。
2．同一種蛋白質(zhì)在不同條件下，等電點(diǎn)不同。在鹽溶液中，蛋白質(zhì)若結(jié)合較多的陽(yáng)離子，則等電點(diǎn)的pH值升高；因?yàn)榻Y(jié)合陽(yáng)離子后，正電荷相對(duì)增多，只有pH值升高才能達(dá)到等電點(diǎn)狀態(tài)，如胰島素在水溶液中的等電點(diǎn)為5.3，在含一定濃鋅鹽的水—丙酮溶液中的等電點(diǎn)為6；如果改變鋅鹽的濃度，等電點(diǎn)也會(huì)改變。蛋白質(zhì)若結(jié)合較多的陰離子(如C1-、SO42-等)，則等電點(diǎn)移向較低的pH值，因?yàn)樨?fù)電荷相對(duì)增多了，只有降低pH值才能達(dá)到等電點(diǎn)狀態(tài)。
3．目的藥物成分對(duì)pH值的要求。生產(chǎn)中應(yīng)盡可能避免直接用強(qiáng)酸或強(qiáng)堿調(diào)節(jié)pH值，以免局部過酸或過堿，而引起目的藥物成分蛋白或酶的變性。另外，調(diào)節(jié)pH值所用的酸或堿應(yīng)與原溶液中的鹽或即將加入的鹽相適應(yīng)，如溶液中含硫酸銨時(shí)，可用硫酸或氨水調(diào)pH值，如原溶液中含有氯化鈉時(shí)，可用鹽酸或氫氧化鈉調(diào)pH值?？傊瑧?yīng)以盡量不增加新物質(zhì)為原則。
4．由于各種蛋白質(zhì)在等電點(diǎn)時(shí)，仍存在一定的溶解度，使沉淀不完全，而多數(shù)蛋白質(zhì)的等電點(diǎn)又都十分接近，因此當(dāng)單獨(dú)使用等點(diǎn)電沉淀法效果不理想時(shí)，可以考慮采用幾種方法結(jié)合來實(shí)現(xiàn)沉淀分離。
