western blot跑不出條帶,是什么原因
轉(zhuǎn)膜的問題,膜和膠之間有氣泡等。
Westernblot法即是一種將電泳與KIJSA結(jié)合起來的技術(shù),可分為電泳、轉(zhuǎn)印、酶免疫測定3個階段。Westernblot法結(jié)合了電泳的高分辨率和酶免疫測定的高敏感性和特異性,是一種能用于分析樣本組分的免疫學(xué)測定方法。
生物大分子印跡法實際上是凝膠電泳技術(shù)、固定化技術(shù)及分子親和技術(shù)三者融為一體的綜合性技術(shù),其核心在于把凝膠電泳已分離的區(qū)帶轉(zhuǎn)移并印跡于固定化紙上。
生物大分子印跡法始創(chuàng)于1975年,內(nèi)蘇格蘭愛丁堡大學(xué)E.M.Southern首先提出。他將限制酶切后的DNA片段先進(jìn)行瓊脂糖凝膠電泳,把一張硝酸纖維素紙放在凝膠上,利用毛細(xì)作用原位凝膠中的DNA八片段轉(zhuǎn)移到硝酸纖維素紙上使之固定化。由于這種技術(shù)類似用吸干作品上的墨跡,使吸墨紙染上墨跡而被稱為印跡法(blotting)。
1979年,Towbin等人利用電洗脫裝置作為印跡動力,首先把Westernblot法用于抗原撿出,并稱之為免疫印跡法(immunoblotting)。對應(yīng)于Southern(DNA分子雜交)、NoHhern(RNA分子雜交)。
1981年Burnette把免疫印跡法稱為Western blotting即蛋白質(zhì)印跡法-Westernblot法。