電泳法分離混合蛋白質(zhì)的基本原理
電泳法分離混合蛋白質(zhì)的基本原理是根據(jù)蛋白質(zhì)的電荷不同即酸堿性質(zhì)不同分離蛋白質(zhì)混合物的方法。
電泳：在外電場(chǎng)的作用下，帶點(diǎn)顆粒將向著與其電性相反的電極移動(dòng)，這種現(xiàn)象稱為電泳。電泳技術(shù)可用于氨基酸、肽、蛋白質(zhì)和核苷酸等生物分子的分析分離和制備。 區(qū)帶電泳是由于在支持物上電泳蛋白質(zhì)混合物被分離為若干區(qū)帶。
電泳前用緩沖液浸潤(rùn)薄膜或?yàn)V紙等支持物或用緩沖液直接配置成凝膠，將待分離的蛋白質(zhì)樣品加在它的一端或中央，支持物的兩端與電極連接，通電電泳。電泳完畢，各個(gè)組分分布在不同的區(qū)域，用顯色劑（蛋白質(zhì)可用考馬斯亮藍(lán)或氨基黑等染色）顯色后可以顯示出各個(gè)組分。
氨基酸混合物特別是寡聚核苷酸混合物一次電泳往往不能完全分開。這種情況可以將第一次電泳分開的斑點(diǎn)通過支持介質(zhì)間的接觸印跡轉(zhuǎn)移到第二個(gè)支持介質(zhì)上，旋轉(zhuǎn)90°，進(jìn)行第二次電泳。這種方法稱為雙向電泳。
聚丙烯酰胺凝膠電泳：以聚丙烯酰胺凝膠為支持物，一般制成凝膠柱或凝膠板，凝膠是由相連的兩部分組成（小的部分是濃縮膠，大的部分為分離膠），這兩部分凝膠的濃度、緩沖液組分和離子強(qiáng)度、pH以及電場(chǎng)強(qiáng)度都是不同的，即不連續(xù)性。電泳時(shí)樣品首先在不連續(xù)的兩相間積聚濃縮而成很薄的起始區(qū)帶，然后再進(jìn)行電泳分離。
電泳有三種物理效應(yīng)：1、樣品的濃度效應(yīng)；2、凝膠對(duì)被分離分子的篩選效應(yīng)；3、一般電泳分離的電荷效應(yīng)。
毛細(xì)管電泳：高效毛細(xì)管電泳、毛細(xì)管區(qū)帶電泳、自由溶液毛細(xì)管電泳、毛細(xì)管電泳，可分離氨基酸、肽、蛋白質(zhì)、DNA片段和核酸以及多種小分子，也可用于手性化合物的分離。
等點(diǎn)聚焦（IEF）分離蛋白質(zhì)混合物是在具有pH梯度的介質(zhì)（如濃蔗糖溶液）中進(jìn)行。在外電場(chǎng)作用下各種蛋白質(zhì)將移向并聚焦在等于其等電點(diǎn)的梯度處，并形成一個(gè)很窄的區(qū)帶。
pH梯度制作一般利用兩性電解質(zhì)，它是脂肪族多胺和多羧類的同系物，它們具有相近但不相同的解離常數(shù)和等電點(diǎn)。在外電場(chǎng)作用下，自然形成pH梯度。
層析聚焦：根據(jù)蛋白質(zhì)的等電點(diǎn)差異分離蛋白質(zhì)混合物的柱層析方法。?
