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轉(zhuǎn)膜后,膜上其他的空白位置需要用封閉液封閉。Western的靈敏度某種程度上受限于封閉做的好不好。
在做Western blot實(shí)驗(yàn)中,會(huì)用到固相載體(如NC膜,PVDF膜),在這些固相載體表面有很多洞洞,通過電轉(zhuǎn),膠上的蛋白被轉(zhuǎn)移到膜上,蛋白以機(jī)械填補(bǔ)(堆積)和吸附的方式結(jié)合于表面。
蛋白塞進(jìn)了表面的很多洞洞里面,但是蛋白并不是連續(xù)的,而有很多空隙,抗體也是蛋白,也會(huì)被吸附在空的洞里,這樣就會(huì)有很多非特異性的信號(hào)。
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