關(guān)于DNA滾環(huán)復(fù)制的基本介紹
滾環(huán)式復(fù)制(rolling circle replication)是噬菌體中常見的DNA復(fù)制方式。許多病毒DNA的復(fù)制、質(zhì)粒、F因子在接合(conjugation)轉(zhuǎn)移時其DNA的復(fù)制,以及許多基因擴增時都采用這種方式。
在以這種機制進行的復(fù)制中,親代雙鏈DNA的一條鏈在DNA復(fù)制起點處被切開,其5'端游離出來。這樣,DNA聚合酶Ⅲ便可以將脫氧核糖核苷酸聚合在3'-OH端。當(dāng)復(fù)制向前進行時,親代DNA上被切斷的5'端繼續(xù)游離下來,并且很快被單鏈結(jié)合蛋白所結(jié)合。因為5'端從環(huán)上向下解鏈的同時伴有環(huán)狀雙鏈DNA環(huán)繞其軸不斷的旋轉(zhuǎn),而且以3'-OH端為引物的DNA生長鏈則不斷地以另一條環(huán)狀DNA鏈為模板向前延伸,因而稱為滾環(huán)復(fù)制。由于只有一條DNA鏈是完整的,因而在DNA解鏈時不會產(chǎn)生拓撲學(xué)上的問題,即未解鏈的雙螺旋區(qū)不會產(chǎn)生超螺旋。當(dāng)5'-端從環(huán)上解下來后不久,即與單鏈結(jié)合蛋白結(jié)合,以后可移動的引發(fā)體便在其上形成,以引發(fā)RNA引物的合成,然后由DNA聚合酶Ⅲ催化合成岡崎片段。這個過程與前述的DNA滯后鏈的合成一樣。最后由DNA聚合酶Ⅰ切除RNA引物,并填充間隙構(gòu)成完整的DNA鏈。5'端之所以能從環(huán)上不斷解鏈,主要是由于DNA聚合酶Ⅲ及引發(fā)體構(gòu)成的復(fù)制體中的螺旋酶不停的向前移動所致。在這種復(fù)制方式中,DNA的延伸可以一直進行下去,產(chǎn)生的DNA鏈可以是親代DNA單位長度的許多倍。這么長的DNA鏈是如何轉(zhuǎn)變?yōu)閱挝婚L度的DNA分子的,目前尚不清楚??赡苁怯商禺惖膬?nèi)切酶切開產(chǎn)生單位長度的子代DNA。這些DNA可自身環(huán)繞,或保持線性分子狀態(tài)。
某些質(zhì)粒進行的滾環(huán)復(fù)制與噬菌體進行的滾環(huán)復(fù)制并非完全的相同,它們至少存在以下幾點差別:
1.質(zhì)粒在進行滾環(huán)復(fù)制時,正鏈和負鏈必須等量復(fù)制。
2.具有兩個復(fù)制起始區(qū),即雙鏈起始區(qū)和單鏈起始區(qū),它們分別起動前導(dǎo)鏈(正鏈)和后隨鏈(負鏈)的合成。