ELISA之洗板技巧——全自動(dòng)酶免工作站、洗板機(jī)
洗板是ELISA試驗(yàn)中用到最多的一個(gè)步驟，因此優(yōu)化ELISA的重點(diǎn)之一在于洗板。洗板是為了分離未結(jié)合的游離物質(zhì)，只保留已結(jié)合在微孔板上的固相物質(zhì)，以供最終檢測(cè)。本文將為您介紹BIOBASE全自動(dòng)酶免工作站和洗板機(jī)洗板的技巧。
全自動(dòng)洗板過程最重要的是洗滌參數(shù)的設(shè)置，大部分的參數(shù)都會(huì)對(duì)結(jié)果造成直接影響，因此我們從以下幾個(gè)重要參數(shù)進(jìn)行分析和探討。
1、注液量
如果你的實(shí)驗(yàn)結(jié)果出現(xiàn)較多的假陽性，如果你懷疑這是洗板未洗干凈造成的，那么你需要將注液量調(diào)大，最好是注滿整個(gè)孔。注液量太少洗不到微孔較高的位置，而這些位置可能也有殘留的待檢測(cè)物質(zhì)，從而使最終結(jié)果出現(xiàn)假陽性。ELISA微孔板的廠家一般會(huì)在試劑盒的說明書中寫明包被量，行業(yè)中通常使用的包被量是200μl，這種情況一般建議使用300 μl注液量進(jìn)行洗滌。一般來說，注液量越大，則殘留的抗體或抗原量就越少。增大注液量最直接的方法是注入過量的洗滌液，通常96孔板的每個(gè)孔能容納330至460μl。BIOBASE全自動(dòng)酶免工作站和洗板機(jī)可設(shè)置遠(yuǎn)遠(yuǎn)超出這個(gè)量的注液量，因?yàn)橄窗孱^結(jié)構(gòu)設(shè)計(jì)了防溢流功能，就是在分液的同時(shí)打開吸液功能，將多余的洗滌液吸走，這樣既增加了注液量又不會(huì)溢出孔外污染其他孔。
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2、洗板次數(shù)和洗板強(qiáng)度
第二個(gè)影響洗滌效果的主要參數(shù)是洗板次數(shù)和洗板強(qiáng)度。當(dāng)然，洗板次數(shù)越多，洗板強(qiáng)度越大，殘留量也就越低。但是洗板次數(shù)過多或洗板強(qiáng)度過大可能會(huì)破壞已包被的固相載體，反而使檢測(cè)結(jié)果不準(zhǔn)確。通常ELISA微孔板的廠家會(huì)在說明書中注明建議的洗板次數(shù)。BIOBASE全自動(dòng)酶免工作站和洗板機(jī)可根據(jù)實(shí)際情況自由設(shè)置洗板強(qiáng)度，通常默認(rèn)為中等強(qiáng)度洗5次，這是符合大多數(shù)試劑的參數(shù)。但是，有時(shí)候也會(huì)遇到一些特殊情況的試劑，比如游離的物質(zhì)吸附性較強(qiáng)，較難洗凈，這時(shí)就需要增大洗板強(qiáng)度或洗板次數(shù)；或者恰恰相反，參與結(jié)合的固相載體不是特別牢固，容易被沖洗掉，這時(shí)就需要減弱洗板強(qiáng)度或減少洗板次數(shù)。
3、吸液高度和吸液位置
最后一個(gè)影響洗板效果的參數(shù)就是吸液高度和吸液位置，吸液高度會(huì)明顯影響殘留量，如果吸頭與反應(yīng)孔底部的距離稍大，那就會(huì)讓殘留量急劇增加。反之，如果吸頭壓著反應(yīng)孔底部，液體比較難進(jìn)入吸頭，那么也會(huì)使吸液效率降低，殘留量增加。
大多數(shù)洗板機(jī)會(huì)使用浮動(dòng)的洗板頭，這種洗板頭有一定的自由調(diào)節(jié)空間，不需要根據(jù)不同的微孔板設(shè)置不同的吸液高度，而是直接下降到微孔底部進(jìn)行吸液。BIOBASE全自動(dòng)酶免工作站和洗板機(jī)均采用這種洗板頭，下降到微孔底部，接觸后會(huì)自然頂起一部分，這樣就使得吸液針緊貼底部進(jìn)行吸液，同時(shí)吸液針端面開有豁口，不會(huì)妨礙吸液效率。
吸液的位置也對(duì)殘留量有著重要影響。如果每個(gè)孔只使用一個(gè)抽吸點(diǎn)，也就是一點(diǎn)吸液（這很常見，因?yàn)楦欤?，那么吸液的位置是非常重要的。大部分廠家會(huì)把這個(gè)位置設(shè)置在微孔的中間位置，因?yàn)檫@樣整個(gè)孔中的液體抽吸過程比較均勻，但是這個(gè)位置其實(shí)并不是最佳抽液位置，最佳的位置取決于洗頭的形狀，一般來說，在孔中心與孔壁之間的某處。因此，BIOBASE全自動(dòng)酶免工作站和洗板機(jī)采用兩點(diǎn)吸液，在孔中心和孔壁之間取前后兩點(diǎn)進(jìn)行吸液，使殘留量降到最小。
