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方案摘要:
在植物領(lǐng)域的互作研究中,可能會(huì)遇到各種困難:
1. 蛋白與小分子互作:植物信號(hào)通路研究中常涉及到膜蛋白與離子/激素類等小分子(1kD以下)的互作,分子量差異大,互作檢測(cè)信噪比低;
2. 難純化:植物蛋白原核表達(dá)后常處于包涵體內(nèi),較難提純;轉(zhuǎn)基因植物蛋白表達(dá)量低,難純化,且植物自發(fā)熒光高;GFP融合表達(dá)蛋白,無(wú)法純化;體外緩沖液條件下無(wú)互作
3. 競(jìng)爭(zhēng)結(jié)合實(shí)驗(yàn):傳統(tǒng)的競(jìng)爭(zhēng)結(jié)合實(shí)驗(yàn)(Pull Down,BiFC等)操作步驟繁瑣,假陽(yáng)性高,樣品消耗量大,且無(wú)法定量分析結(jié)合同一個(gè)目標(biāo)的兩種或以上分子的親和力;
4. 蛋白質(zhì)和核酸互作:常規(guī)EMSA的檢測(cè)方法步驟繁瑣,且涉及到放射性同位素等有害物質(zhì),同時(shí)無(wú)法進(jìn)準(zhǔn)確定量;RNA易降解;
5. 樣品準(zhǔn)備周期長(zhǎng),處理繁復(fù),樣品珍貴且數(shù)量少。傳統(tǒng)互作實(shí)驗(yàn)樣品消耗量大
這些問(wèn)題均可使用MST分子互作技術(shù)一一解決!